[发明专利]具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法及其产品

摘要

本发明涉及具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法及其产品，其制备方法步骤如下：利用转人FGF1基因蚕丝提取含人FGF1蛋白的丝胶蛋白，得含人FGF1蛋白的丝胶蛋白溶液，然后经复性后再用水透析得FGF1丝胶蛋白水溶液，离心获得FGF1丝胶蛋白水凝胶，然后在4℃放置，化学交联剂交联或诱导剂诱导形成FGF1丝胶蛋白凝胶材料，值得的凝胶材料具有促进细胞增殖的活性，在组织工程学中具有广阔的应用潜力。

主权项

1.具有促进细胞增殖活性的FGF1丝胶蛋白凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：利用转人FGF1基因蚕丝提取含人FGF1蛋白的丝胶蛋白，得含人FGF1蛋白的丝胶蛋白溶液，然后经复性后再用水透析得FGF1丝胶蛋白水溶液，离心获得FGF1丝胶蛋白水凝胶，然后在4 ℃放置，化学交联剂交联或诱导剂诱导形成FGF1丝胶蛋白凝胶材料；所述提取为将转人FGF1基因蚕丝经过液氮研磨成粉末，加水制成50 mg/ml的浓度，利用抽提缓冲液萃取，然后于4 ℃条件下，18,000 rpm条件下离心10 min，上清液即为含人FGF1蛋白的丝胶蛋白溶液；所述萃取为使用pH 7.0、含50mM Tris‑HCl和8M 尿素的溶液在80℃条件下萃取1h； 所述复性为将含人FGF1蛋白的丝胶蛋白在透析液中、4 ℃透析上清液12 h，然后利用对半稀释法用复性液对透析液进行置换，重复4次，每次12h，再用水透析去除复性液，最后将复性的含有重组FGF1蛋白的丝胶蛋白溶液在4 ℃、4000 rmp条件下离心10 min，收集沉淀即可；所述透析液各组分浓度如下：尿素8 M，二硫苏糖醇1 mM，Tris‑Cl 50 mM、pH 7.0；NaCl 250 mM；所述复性液各组分浓度如下：谷胱甘肽 2.0 mM；氧化谷胱甘肽0.2 mM；二硫苏糖醇1 mM；Tris‑Cl 50 mM、pH 7.0；NaCl 250 mM。