[发明专利]一种血浆直接亚硫酸氢盐转化的方法及其应用

摘要

本发明涉及一种血浆直接进行亚硫酸氢盐转化的方法及其应用。本发明所述方法与市面上同类亚硫酸氢盐转化产品最大的优势在于无需提取血浆游离DNA，血浆可直接作为亚硫酸氢盐转化样本，既节省了提取游离DNA的时间，又可以避免在提取过程中游离DNA的损耗。其次，本发明所述方法为了保护DNA免受杂蛋白、脂质等的影响，在亚硫酸氢盐转化体系中加入了保护剂。另外，为了进一步提高游离DNA的回收率，本发明采用高灵敏度的磁珠进行回收。整个转化过程不超过2小时，不涉及离心操作，更易于实现自动化。本发明所述方法具有成本低、操作简便、转化率高和所得DNA纯度高等优点。

主权项

1.一种血浆直接亚硫酸氢盐转化的方法及其应用，其特征在于，包括如下步骤：(1)向离心管内加入血浆、样本处理液、蛋白酶K和亚硫酸氢盐溶液，充分混匀，高温条件下恒温孵育；(2)向上述反应液中加入20～35μL磁珠和结合液，涡旋混匀，调节恒温振荡器转速800～1500rpm，温度18～50℃，孵育20～60min，孵育结束后将反应管置于磁力架，静置1‑10min，弃去残余液体；(3)加入漂洗液I，充分混匀，所得反应液置于磁力架，静置1～10min，弃去残余液体；(4)加入漂洗液II，充分混匀，所得反应液置于磁力架，静置1～10min，弃去残余液体；(5)重复步骤(4)，室温条件保证管内水分蒸发完全；(6)向上述管内加入适量洗脱液45～100μL，37～60℃恒温孵育5～15min，使结合在磁珠上的DNA充分洗脱下来，并转移至新的不含核酸酶的离心管内，适当条件保存。