[发明专利]一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法，具体提取方法如下：步骤一：组织样本：取适量的人或动物组织样本，并且用剪刀剪碎，转移至一个干净的1.5ml离心管，加入30ul Proteinase K和300ul Buffer ATL，剧烈震荡10秒使之混匀；步骤二：消化：温浴30‑60分钟，温浴后，如果还有未消化完全的样本，用吸头将其挑出丢弃，并且加入300ul AL，迅速震荡混匀。本发明所提供的提取方法单个样本提取时间要比常规提取时间短一些，而且也可以进行多个样本提取，且提取时间并不会增加很多，从而大大提高了DNA提取效率，且所提取的DNA分子量主片段在75kb左右，完全符合Long‑read测序技术，从而减少了因DNA片段过大，使Long‑read测序技术负担过高。

主权项

1.一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法，具体提取方法如下：步骤一：组织样本：取适量的人或动物组织样本，并且用剪刀剪碎，转移至一个干净的1.5ml离心管，加入30ul Proteinase K(蛋白酶K)和300ul Buffer ATL(缓冲液ATL)，剧烈震荡10秒使之混匀，再执行步骤二；步骤二：消化：在步骤一执行之后，温浴30‑60分钟，温浴后，如果还有未消化完全的样本，用吸头将其挑出丢弃，并且加入300ul AL，迅速震荡混匀，再执行步骤三；步骤三：细胞裂解：在步骤二执行之后，将制得的样本放到掌式离心机上短离1秒，温浴10分钟，然后加入600ul Buffer BD(缓冲液BD)和30ul MagBind Particle(粒子)，轻轻缓慢地180°颠倒混匀20‑30次，室温静置3分钟，期间轻轻地颠倒混匀数次，然后再将离心管短离0.5秒，再执行步骤四；步骤四：磁珠结合：在步骤三执行之后，将离心管放到磁力架上，吸附5分钟，然后将废液完全吸净弃掉，再执行步骤五；步骤五：高盐溶液洗涤：在步骤四执行之后，加入800ul的BW1 Buffer(缓冲器BW1)，盖上盖子，轻轻的180°颠倒磁力架使BW1 Buffer(缓冲器BW1)完全清洗离心管的内部，180°颠倒清洗1分钟后再静置1分钟，然后放到磁力架上吸附3分钟后吸掉废液，在吸掉废液的时候保持离心管在磁力架上，并尽量洗干净离心管内部的所有废液，包括管底、管盖及管壁上的废液，再执行步骤六；步骤六：乙醇洗涤：在步骤五执行之后，加入800ul的75％乙醇，盖上盖子，轻轻地180°颠倒磁力架使75％乙醇完全清洗离心管的内部，颠倒清洗1分钟后，然后放到磁力架上吸附3分钟后吸掉废液，在吸掉废液的时候保持离心管在磁力架上，并尽量吸干净离心管内部的所有废液，包括管底、管盖及管壁上的废液，再执行步骤七；步骤七：DNA回溶：在步骤六执行之后，将离心管从磁力架上取下，盖上盖子，短离3次，每次0.5秒，再将离心管放到磁力架上开盖吸附2分钟，吸掉管底的残留液体，然后开盖晾干5‑10分钟，再将离心管从磁力架上取下，每管加入32ul的EB，用移液器轻轻地将吹打磁珠，使之从管壁上剥落至液体里，然后盖上管盖，轻弹混匀，放到60℃温浴5分钟，温浴期间，每隔1‑2分钟取出轻弹混匀，将离心管放到磁力架上吸附5分钟，然后将DNA溶液转移至新的1.5ml离心管内，分别进行Qubit和FA‑50kb kit检测，再执行步骤八；步骤八：DNA预存：在步骤七执行之后，提取后的DNA溶液需要在低温中保存，如果冻存后取用，必须待其室温溶解后轻弹混匀，不可剧烈震荡使DNA断裂。