[发明专利]一种浒苔孢子体的染色体制备方法

摘要

本发明公开了一种浒苔孢子体的染色体制备方法，包括以下步骤：取材、脱水、秋水仙素预处理、固定、混合酶液酶解、70％乙醇终止酶解、高位滴片和DAPI染色；将浒苔孢子体细胞经秋水仙素处理，使其固定在细胞分裂中期，经混合酶液处理后高位滴片，浒苔孢子体的细胞壁、细胞膜以及细胞内多糖等物质彻底去除，实现细胞分散均匀、染色体分散良好，背景清晰，中期分裂细胞相对较多，由上述方法制得浒苔孢子体的染色体为1～2μm的短棒状小染色体，2n＝18，有利于后期浒苔孢子体的染色体核型分析。

主权项

1.一种浒苔孢子体的染色体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取材及预处理：取微量状态良好的孢子体藻体放入离心管中，用灭菌海水清洗2～3次，12000rpm离心2min，去除多余水分；(2)秋水仙素处理：向步骤(1)预处理后的孢子体藻体加入秋水仙素，4℃冰箱内放置6～12h；(3)固定：将步骤(2)处理后的物质离心取沉淀物，加入卡诺固定液振荡摇匀，4℃冰箱内放置不低于24h；(4)浒苔藻体细胞酶解：将步骤(3)固定后的物质水洗后，12000rpm离心2min取沉淀，加入适量混合酶液进行酶解反应；(5)终止酶解：向步骤(4)酶解后的物质中加入70％的乙醇终止酶解反应，并水洗；(6)滴片：向步骤(5)水洗后的酶解产物加入100μl 4℃的冰醋酸，振荡混匀，取少量酶解产物高位滴片，自然晾干；(7)DAPI染色：将步骤(6)所得制片在湿润的盒子中保存5min，在相差显微镜下进行镜检，选取染色体分裂相分散好的部位加入15μL DAPI染色，即得。