[发明专利]用于筛选饲料抗生素替代品的方法及其产品

摘要

本发明属于基因重组技术领域，具体公开了一种通过重组质粒构建猪肠道PXR(pgPXR)细胞平台来筛选抗生素替代品的方法，该过程包括以下步骤：目的基因pgPXR的提取，扩增，纯化回收，酶切，连接，转化与鉴定。该发明用到的材料主要包括：猪空肠上皮细胞系IPEC‑J2，pCI‑neo连接载体，以及DH5α感受态细胞。通过该技术可以得到稳定表达PXR受体的猪肠道细胞系，并作为有效的抗生素替代品筛选平台。

主权项

1.一种用于筛选抗生素候选替代品的稳转pg‑PXR的IPEC‑J2细胞系或细胞平台的制备方法，步骤包括：（1）猪肠细胞中pgPXR的扩增：提取新鲜猪空肠上皮组织的总RNA，并逆转录为cDNA，设计引物后通过PCR扩增目的基因pgPXR，并回收纯化目的基因片段；（2）对目的基因片段和载体的双酶切：用EcoRI和SalI将pgPXR的PCR纯化产物及目的载体pCI‑neo‑vector双酶切，并通过电泳鉴定并回收目的基因片段和载体；（3）片段的酶连接：将酶切后的pgPXR基因带和pCI‑neo‑vector载体带进行连接，并于4℃连接过夜后，转化感受态细胞；（4）鉴定和筛选pg‑PXR重组质粒：从转化的感受态重组细胞提取质粒，进行EcoRI、SalI双酶切，通过电泳鉴定质粒是否含有pg‑PXR的pCI‑neo‑vector重组质粒；（5）转染猪空肠细胞IPEC‑J2细胞：传代的IPEC‑J2细胞达到对数期后，将脂质体与重组质粒溶液混合后，加至IPEC‑J2细胞表面进行转染；（6）筛选稳转pg‑PXR的IPEC‑J2细胞系或细胞平台：通过检测pgPXR mRNA或蛋白的表达，以筛选转染的细胞。