[发明专利]一种紫苑石斛的组织培养育苗方法

摘要

本发明公开了一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，包括：外植体选择步骤、果荚消毒步骤、播种步骤、继代培养步骤、生根培养步骤、炼苗驯化步骤和移栽步骤。该紫苑石斛的组织培养育苗方法能够有效的提高紫苑石斛种苗的繁育速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现紫苑石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。 1

主权项

1.一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，包括：

外植体选择步骤：在紫苑石斛母本植株的开花期进行人工授粉，长出果荚后，继续培育，采摘成熟果荚并置于冰箱中保存，得到备用果荚；

果荚消毒步骤：取所述备用果荚，将种壳表面清洗干净，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚移至接种室中，进行酒精消毒和无菌水冲洗，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用次氯酸钠消毒和无菌水冲洗，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用升汞消毒和无菌水冲洗，得到第四洁净果荚；

播种步骤：解剖所述第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基上，转移至培养室中培养，得到萌芽种子；

继代培养步骤：将所述萌芽种子置于培养室中继续培养，直至种苗长到2‑3cm，获取一级瓶苗；将所述一级瓶苗转移至1/2MS培养基中，生长至5‑6cm时，获取二级瓶苗；

生根培养步骤：将所述二级瓶苗转移至生根培养基中进行培养，获取生根瓶苗；

炼苗驯化步骤：将所述生根瓶苗置于培养室中培养，然后移到室外环境中进行驯化，获取驯化苗；

移栽步骤：将所述生根培养基的瓶盖打开，继续放置所述驯化苗3‑5天，然后倒出，并用多菌灵浸泡苗根部，接着洗净阴干，移栽至基质中进行驯化。

2.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述外植体选择步骤中，紫苑石斛母本植株的植株年龄为2‑4年；长出果荚后继续培育3‑4个月；将所述成熟果荚置于3‑7℃的冰箱中保存1.5‑2.5周。

3.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述果荚消毒步骤中，将所述备用果荚用洗洁精水或洗衣粉水浸泡15‑20min，用毛刷刷干净种壳表面，并用自来水冲洗10‑15min，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚放至洁净烧杯中，移至接种室，在无菌操作台上用75％医用酒精浸泡30‑60s，浸泡期间用镊子不断搅拌，保证消毒彻底，接着用无菌水冲洗3‑4次，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用浓度为2％的次氯酸钠消毒外壳1‑2min，接着用无菌水冲洗3‑4次，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用0.1％的升汞消毒6‑8min，接着用无菌水冲洗4‑5次，得到第四洁净果荚。

4.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述播种步骤中，用经过280‑290℃高温消毒的解剖刀和镊子解剖所述第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基后，并盖上经过消毒的培养基瓶盖；所述培养室的温度为24‑26℃，光照强度为2000‑2500Lx，光照时间为10‑12小时/天，培养30‑35天。

5.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述播种步骤中，在所述1/2MS培养基中添加2％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉，并将培养基的pH调至5.8‑6.0。

6.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述继代培养步骤中，将所述萌芽种子置于光照强度为2000‑2500Lx的培养室中继续培养，光照时间为10‑12小时/天，生长50‑60天，直至种苗长到2‑3cm，获取一级瓶苗；在无菌环境下将所述一级瓶苗转移至1/2MS培养基中培养50‑60天，生长至5‑6cm时，获取二级瓶苗。

7.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述继代培养步骤中，在所述1/2MS培养基中添加0.8mg/L的萘乙酸、1.5mg/L的6苄基腺嘌呤6‑BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁和0.3g/L的活性碳粉，并将培养基的pH调至5.8‑6.0。

8.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述生根培养步骤中，在无菌环境下将所述二级瓶苗转移至生根培养基中培养85‑95天，获取生根瓶苗；所述生根培养基为MS培养基，在所述MS培养基中添加2.0mg/L的萘乙酸、1.0mg/L的6苄基腺嘌呤6‑BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、25g/L的香蕉汁和0.3g/L的活性碳粉，并将培养基的pH调至5.8‑6.0。

9.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述炼苗驯化步骤中，将所述生根瓶苗置于培养室中培养85‑95天，然后将其移到室外环境中放置15‑30天，获取驯化苗。

10.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述移栽步骤中，用800‑1000倍的水稀释多菌灵，获取浸泡液并浸泡苗根部15‑20min，然后用清水洗净并阴干。