[发明专利]一种麝香石斛组培扩繁育苗的方法

摘要

本发明公开了一种麝香石斛组培扩繁育苗的方法，包括外植体选择的步骤、外植体消毒的步骤、播种的步骤、继代培养的步骤、生根培养的步骤、炼苗、驯化移栽的步骤。本申请的组织培养扩繁方法能够有效的提高麝香石斛种苗的繁育的速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现麝香石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。 1

主权项

1.一种麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于包括，

外植体选择的步骤：选择健康的麝香石斛2‑4年的母本植株；在春季麝香石斛开花期间对石斛进行人工授粉，让其长出果荚，经过3‑4个月精心培育，待果荚成熟时，将其采摘放至冰箱在3‑7℃的环境下保存2周；

外植体消毒的步骤：取出果荚，将果荚用洗洁精或洗衣粉水浸泡15‑20min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗10‑15min；将其放到洁净烧杯，移至接种室，在无菌环境下用医用酒精浸泡，浸泡期间用镊子不断搅拌使其消毒彻底，无菌水冲洗3‑4次；再用次氯酸钠消毒外壳，无菌水冲洗3‑4次；最后用升汞消毒，无菌水冲洗4‑5次，放到超净工作台上的无菌盘里备用；

播种的步骤：将消毒好的果夹用解剖刀和镊子解剖开露出黄色果粉，将果粉撒到1/2MS培养基上，消毒瓶盖后封好盖子，转到培养室中进行培养，培养30‑45天种子开始萌发；

继代培养的步骤：萌发的麝香种子在光照强度为1500‑2000lx，光照时间为10‑12小时/天的条件下生长60天，麝香种苗长到2‑3cm高，形成一级母瓶，此时将瓶苗在无菌环境下转到1/2MS培养基中培养60天，长至5‑6cm时称为二级母瓶；

生根培养的步骤：将生长60天的二级母瓶在无菌环境下转至MS培养基中生根培养90天；

炼苗、驯化移栽的步骤：生根瓶苗在培养室培养90天，生根良好，苗粗壮，将其移到室外环境中放置15‑30天，让其适应外界环境；打开瓶盖放置3‑5天，将苗倒出洗净培养基，用杀菌剂浸泡麝香石斛苗根部15‑20min，洗净阴干水分，将其移栽到基质中进行驯化。

2.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在外植体选择的步骤中，选择3年生的麝香石斛为母本植株最佳；所述果荚成熟时以外种壳黄绿色，完好无裂为准。

3.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在外植体消毒的步骤中，所述医用酒精的体积浓度为75％，浸泡时间为30‑60s；所述次氯酸钠的体积浓度为2％，消毒时间为1‑2min；所述升汞的质量浓度为0.1％，消毒时间为6‑8min。

4.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在播种的步骤中，所述解剖刀和镊子需要经286℃高消毒并冷却。

5.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在播种的步骤中，所述1/2MS培养基中添加0.2mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉，培养基的pH调至6.0；所述培养室的培养条件如下：温度为24℃‑26℃，光照强度为1500‑2000lx，光照时间为10‑12小时/天。

6.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在继代培养的步骤中，所述1/2MS培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸、1.0mg/L的6苄基腺嘌呤6‑BA、20g/L的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、3g/L的活性碳粉，培养基的pH调至6.0。

7.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在生根培养的步骤中，所述MS培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸、2.0mg/L的6苄基腺嘌呤6‑BA、20g/L的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、25g/L的香蕉汁、3g/L的活性碳粉，培养基的pH调至6.0。

8.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在炼苗、驯化移栽的步骤中，所述室外环境的温度为22‑28℃、湿度为45％‑75％，且需要避免强光直射。

9.如权利要求1所述的麝香石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在炼苗、驯化移栽的步骤中，所述杀菌剂为多菌灵溶液；使用时将多菌灵稀释到800‑1000倍。