[发明专利]一种肺癌耐药细胞系及其制备方法

摘要

本发明涉及耐药细胞系领域，特别涉及一种肺癌耐药细胞系及其制备方法。一种肺癌耐药细胞系的制备方法：肺癌细胞接种于含有21‑93nM肺癌靶向药的培养基中培养，至细胞在该浓度下正常存活和增殖；以50nM的浓度差提升进行培养；至细胞增殖抑制浓度达到IC50的4倍时，按每100nM的浓度差提升进行培养；药物筛选浓度达到IC50的8倍时，按每1μM的浓度差提升培养，直至肺癌细胞能够在10μM奥希替尼的细胞培养体系中维持存活和增殖时，得到肺癌耐药细胞系。该方法在逐步提高培养基中药物浓度的基础上制得耐药细胞系，为后期模拟临床药物耐药，研究肺癌靶向药物耐药机制，研发有效的抗癌药物提供基础。

主权项

一种肺癌耐药细胞系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)、对数生长期的肺癌细胞接种于含有21‑93nM肺癌靶向药的培养基中培养，细胞恢复至正常生长时，再次加入相同浓度的药物，直至细胞在该浓度下正常存活和增殖，以此作为一个培养循环；(b)、以50nM的浓度差提升进行培养，处理20‑28h后，更换无药物浓度的培养基培养24h‑72h，以此为一个循环，直至在相应药物浓度下细胞正常生长；(c)、至细胞增殖抑制浓度达到IC50的4倍时，按每100nM的浓度差提升进行培养，处理时间20‑28h，观察细胞状态：若细胞状态好，则以含当前浓度药物的培养基筛选1周，随后继续增加药物浓度；若细胞状态不好，则更换无药物培养基培养24h‑48h，随后继续加入药物，如此反复直至细胞在此药物浓度下正常生长；(d)、至药物筛选浓度达到IC50所用药物浓度的8倍时，按每1μM的浓度差提升培养，处理时间20‑28h，观察细胞状态：如果细胞状态不好，则更换无药物培养基培养24h‑48h，随后继续加入药物，如此反复直至细胞在此药物浓度下正常生长；如果细胞状态好，则以含当前浓度药物的培养基筛选1周，随后继续增加药物浓度，直至细胞能够在10μM的奥希替尼的培养体系中维持存活和增殖时，得到所述肺癌耐药细胞系。