[发明专利]一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法与应用，所述病毒的胸腺嘧啶核苷激酶(TK)区包含SEQ ID NO.1所示的PD1全长抗体的编码序列。本发明将基因治疗的抑瘤效果与病毒治疗的溶瘤效应有效结合起来，制备了一种可高效表达PD1全长抗体基因的溶瘤痘苗病毒。在溶瘤病毒发挥溶瘤效应裂解肿瘤细胞的同时，大量表达PD1全长抗体，抑制T细胞表面PD1的活性，激活T细胞免疫应答，发挥双重的抗肿瘤效果。相对于单纯的基因疗法或者病毒疗法增强了其对恶性B细胞淋巴肿瘤的杀伤能力。采用病毒复制相关基因缺失的方式，缺失痘苗病毒基因组的TK区，确保病毒在异常增殖的肿瘤细胞内特异性复制，而在正常的细胞中则不能复制，大大增强了溶瘤痘苗病毒载体的安全性。 1

主权项

1.一种重组溶瘤痘苗病毒，其特征在于，所述病毒的胸腺嘧啶核苷激酶(TK)区包含SEQ ID NO.1所示的PD1全长抗体的编码序列。

2.一种权利要求1所述的重组溶瘤痘苗病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)合成人全长PD‑1单克隆抗体，其基因序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)扩增全长PD‑1单克隆抗体，酶切后亚克隆至痘苗病毒穿梭质粒(pTK)的TK区中，构建出重组质粒pCB‑aPD1。其中，aPD1基因由痘苗病毒的早/晚期启动子(P‑se/l)控制。

(3)采用基因同源重组的方式，将pCB‑aPD1质粒转染到已经被感染了野生型痘苗病毒的细胞中，使两者同源重组，产生重组痘苗病毒VV‑aPD1。经筛选后，获得所述TK区包含SEQ ID NO.1所示的PD1全长抗体的编码序列的重组溶瘤痘苗病毒。

3.一种权利要求1所述的重组溶瘤痘苗病毒在制备治疗治疗B细胞淋巴肿瘤的药物中的应用。