[发明专利]伊贝母总多糖的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及伊贝母总多糖的制备方法及其应用，该方法将伊贝母鳞茎自然干燥，机械粉碎，并过筛分离杂质，石油醚脱脂，自然风干后用溶剂，进行连续提取，离心，浓缩，无水乙醇沉淀，再离心，将多糖沉淀物进行真空冷冻干燥，制备出水溶性，热水溶性及酸溶性粗多糖。对粗多糖进行纯化，分别脱蛋白，透析，离子交换树脂和葡聚糖凝胶分离纯化得到三种中性糖。该方法提取得到的总的粗多糖的提取率达到30%。该多糖部位被验证具有抗氧化活性，自由基有清除能力。从天然植物中寻找新抗氧化剂，是现代医药和食品行业发展的新方向；研究多糖及其衍生物的抗氧化作用，开发新的天然抗氧化剂，具有重要的现实意义。本研究可为伊贝母多糖在抗氧化和抗衰老功能性食品中的应用开发提供参考。

主权项

1.一种伊贝母总多糖的制备方法，其特征在于该方法以伊贝母鳞茎为原料，用水及弱酸水溶液作为溶剂进行提取、经无水乙醇沉淀，脱蛋白，透析，离子交换树脂，葡聚糖凝胶等分离纯化得到三种中性多糖，具体操作按下列步骤进行：a、采集伊贝母鳞茎，在阴凉处自然晾干后机械粉碎，粉碎时间为60-180秒，过60目筛，分离杂物，得到粉末物；b、将步骤a中得到的粉末按料液重量比为1:5加入石油醚，室温搅拌1-2小时，反复提取3-4次至未有油脂提取出为止，过滤，自然风干至未有石油醚溶剂残留为止，得到脱脂的伊贝母粉；c、分别制备三种多糖浓缩液：按重量比1:30，将步骤b中得到的脱脂伊贝母粉加水，在室温下搅拌提取2次，提取时间2小时，过滤，合并提取液， 10000rpm，温度4℃，离心10 min，浓缩，得到多糖浓缩液备用；将过滤后的滤渣收集，自然风干，按料液重量比为1:30，将风干后的滤渣加水，温度90℃热水回流提取2次，提取时间2小时，过滤，合并提取液，10000rpm，4℃，离心10min，浓缩，得到多糖浓缩液备用；将过滤后的滤渣收集，自然风干，按料液重量比为1:30，将滤渣加入质量百分比1%柠檬酸pH为2.2，温度90℃回流提取2次，提取时间为2小时，过滤，合并提取液，10000rpm，温度4℃，离心10min，浓缩，得到多糖浓缩液备用；d、将步骤c得到三种多糖浓缩液分别用无水乙醇进行沉淀，温度4℃过夜，10000rpm，温度4℃，离心10min，再将多糖沉淀物进行真空冷冻干燥，分别得到淡黄色的水溶性，白色的热水溶性和酸溶性粗多糖部位，其中三种多糖浓缩液与无水乙醇的体积比1:4；e、将步骤d得到的粗多糖称取500mg，加100ml蒸馏水复溶，用Sevage法进行脱蛋白，Sevage试剂为体积比4:1的氯仿:正丁醇混合物，将复溶的溶液中加入1/3体积的Sevage试剂，摇床震荡20min，7000rpm，离心10min，重复操作7次；再用截留量为12000-14000Da的透析袋蒸馏水透析48h，浓缩，真空冷冻干燥，得到初步纯化的多糖；将初步纯化的多糖分别用离子交换树脂DEAE-52和葡聚糖凝胶Sephadex G-150进行纯化，每一个粗多糖得到一个水洗脱的中性糖，最终得到三种伊贝母总多糖。