[发明专利]一种植物组织中马铃薯腐烂茎线虫的分离方法

摘要

本发明公开一种植物组织中马铃薯腐烂茎线虫的分离方法，将5ml 25％(W/V)Pluronic F‑127水溶液加到细胞培养板中，室温静置30min形成半固态凝胶；将发病薯块切成2‑4mm薄片，于培养板孔边缘浸入Pluronic凝胶中，静置2h，使茎线虫从植物组织中游出；用移液器沿培养板孔另一侧缓慢吸取含有茎线虫的Pluronic凝胶，装入2ml离心管，在4℃放置20min使凝胶溶解，后离心使线虫沉淀，弃上清，加入1ml灭菌水清洗茎线虫，离心、回收茎线虫，经3‑5次重复清洗、离心回收后即获得纯净的茎线虫悬浮液。该方法可显著提高茎线虫的分离效率及分离产物的纯净度，有效满足茎线虫病的研究工作需求。

主权项

1.一种植物组织中马铃薯腐烂茎线虫的分离方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1)称取一定量的Pluronic F-127放入烧杯中，按照Pluronic F-127浓度为25％的比例向烧杯中加入灭菌水，然后将烧杯在冰浴条件下搅拌过夜，待Pluronic F-127完全溶解，溶液澄清透明后放入4℃冰箱保存备用；2)取灭菌的细胞培养板，向培养板的每个板孔中加入5ml Pluronic F-127溶液，室温静置30min使Pluronic F-127溶液形成半固态凝胶，得Pluronic胶；3)将发病薯块切成2-4mm的薄片，用镊子夹取病薯片沿板孔一侧贴壁轻轻放入Pluronic胶中，室温下静置2h，使茎线虫从植物组织中游出；4)用移液器沿板孔另一侧吸取含有茎线虫的Pluronic胶；5)将吸取的含有茎线虫的Pluronic胶装入2ml离心管，在4℃冰箱中放置20min使Pluronic胶溶解，离心使茎线虫沉淀，弃去上层Pluronic胶溶液；6)向离心管中加入1ml预冷的灭菌水，清洗茎线虫，离心回收茎线虫，经3-5次重复清洗、离心回收后即获得纯净的茎线虫悬浮液。