[发明专利]超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法

摘要

本发明涉及一种检测方法，尤其涉及超高效液相色谱‑串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法。本发明样品分果皮和果肉两部位，经甲醇‑水充分提取处理；采用Accucore XL C18柱(150×4mm，4.6μm)分离，甲醇‑0.15％甲酸水为流动相梯度洗脱，电喷雾离子源正负离子切换多反应监测模式串联质谱下检测，外标法定量。结果表明：九种功能性成分在较宽的质量浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.997。三个添加量水平的回收率在83.57％～112.91％之间，相对标准偏差均小于在1.58％～8.33％之间(n＝6)。测定了4批次常山胡柚样品，同时测定了其中的九种功能性成分。本方法快速、灵敏、准确，适用于常山胡柚中九种功能性成分的定性和定量检测。

主权项

超高效液相色谱‑串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法，其特征在于，九种功能性成分分别为圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、柠檬苦素、橙皮素和诺米林，该方法包括以下的步骤：1)标准溶液的配制精密称取九种功能性成分的标准品10mg，精确至0.1mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀配制成1mg/mL的单标储备液；并根据需要移取适量储备液，用甲醇：水＝1∶1(v/v)溶液，稀释成适宜浓度的标准工作溶液，避光保存于4℃冰箱中；2)试样的制备将采集的胡柚经超纯水清洗擦干后，分别分离出常山胡柚的果皮和果肉两部分，取各部位的样品适量分别进行搅碎、混匀，备用；3)样品的前处理3.1)果皮称取试样0.5g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇：水＝6∶4(v/v)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液，提取两次，合并提取液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；3.2)果肉称取试样2.0g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入10mL甲醇：水＝6∶4(v/v)溶液，超声提取5min，8000转/min离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；4)超高效液相色谱分离条件色谱柱：Accucore XL C18柱，150×4mm，4.6μm；柱温：35℃；进样量：50μL；流速：0.5mL/min；流动相：A为甲醇，B为含0.15％甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0.0～1.0min,30％A；1.0～14.0min,30％A～65％A；14.0～14.1min，65％A～95％A；14.1～20.0min,95％A；20.0～20.1min，90％A～30％A；20.1～22.0min，30％A；5)串联质谱分析条件离子源：ESI；扫描方式：正负离子切换扫描模式；检测方式：多反应监测；电喷雾电压+3500(‑3000)V；毛细管温度：270℃，干燥气流量：10L/min；喷雾气压力：45psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：30L/min；保留时间、质荷比、碰撞能量、S‑Lens电压和扫描模式条件进行优化后的质谱条件如下：*为定量离子。