[发明专利]运用HPLC测定复杂组分中β-胡萝卜素、番茄红素含量的方法

摘要

本发明公开了一种运用HPLC测定复杂组分中β‑胡萝卜素、番茄红素含量的方法；包括以下步骤步骤①对照品溶液的配制；步骤②对照品含量测定；步骤③样品处理；步骤④液相色谱条件；步骤⑤结果计算及判断；能够有效解决β‑胡萝卜素、番茄红素的降解给检测带来的困难，也能排除其它色素对其的干扰，且能同时快速准确的测定复杂组分中β‑胡萝卜素、番茄红素的含量。

主权项

运用HPLC测定复杂组分中β‑胡萝卜素、番茄红素含量的方法；其特征是：包括以下步骤：步骤①：对照品溶液的配制：标准溶液A：精密称取β‑胡萝卜素、番茄红素对照品各15mg‑25mg，分别置于两个100ml棕色容量瓶中，各加入BHT15mg‑25mg和二氯甲烷60ml‑75ml，超声溶解3min，冷却后用二氯甲烷定容至刻度；标准溶液B：移取标准溶液A于另一容量瓶中，加环己烷定容至刻度；标准溶液C：移取1ml标准溶液B于取样玻璃瓶中，氮气吹干后，加入15‑25ppm含有BHT的乙酸乙酯溶液，完全溶解后过滤，注入液相色谱仪；标准溶液D：移取5ml标准溶液B于50ml容量瓶中，加环己烷定容至刻度；步骤②：对照品含量测定：液相检测前，采用紫外检测器进行紫外标定,取标准溶液D，用1cm比色皿，以环己烷为空白，在分光光度计上测定β‑胡萝卜素波长455nm处或者番茄红素波长476nm处的吸光度；按下式计算β‑胡萝卜素对照品和番茄红素对照品的含量：式中：A455、A476：标准吸光度；M：对照品的质量；步骤③：样品处理：称取样品粉末于250ml容量瓶中，加入0.1‑0.3g的BHT，加入5‑25ml水，40℃‑60℃，超声反应20‑40min，加入0.05‑0.2g的淀粉酶或者碱性蛋白酶，60℃超声反应20min，待完全溶解后加入70‑90ml的无水乙醇，超声反应2‑10min，再加入90‑110ml的二氯甲烷，超声反应2‑10min，冷却至室温，用二氯甲烷定容至刻度，剧烈摇匀，放置3min左右使固体沉淀，取上清液经0.45μm有机滤膜过滤进样；步骤④：液相色谱条件：步骤⑤：结果计算及判断：通过对照品的保留时间对样品进行定性，外标法计算样品中β‑胡萝卜素、番茄红素的含量，该计算公式为：式中：A样：样品溶液中β‑胡萝卜素或番茄红素的峰面积；C：对照品的含量；A标：标准溶液C中β‑胡萝卜素或番茄红素的峰面积；M标：对照品的质量，g；M样：样品的质量，g；250：样品的稀释倍数；10000：标准溶液的稀释倍数。