[发明专利]一种牛膝中提取和分离的牛膝多肽单体及其制备和应用

摘要

本发明公开了一种从牛膝中提取和分离多肽类化合物的应用方法，通过对牛膝水提取物的盐析处理，粗提物中的多肽采用Sevage试剂法进行富集，采用C18制备柱初步分离与二醇型HILIC柱最终分离的纯化手段，共制得牛膝多肽及其相应的糖肽。本发明涉及的提取物牛膝多肽经实验证明具有促进神经生长、防止神经元凋亡、促进损伤神经再生作用，其药材来源单一，制备方法先进，工艺合理，制剂成分明确，安全性高，药理作用显著。

主权项

1.一种从牛膝中提取和分离多肽类化合物的应用方法，其特征是：采用如下方法制得：(1)多肽的提取：向的牛膝水溶液中加入质量分数为50％～80％(终浓度)的硫酸铵，通过盐析而析出沉淀，高速离心后得到牛膝多肽提取物；采用透析方法和冷冻干燥的方法，除去小分子物质，得到牛膝多肽粗提物；(2)多肽的富集：适量牛膝多肽粗提物溶于纯水中，采用Sevage试剂法进行液液萃取富集；Sevage试剂的组成为氯仿与正丁醇按一定体积比进行混合，再将牛膝多肽粗提取物水溶液与Sevage试剂按适当体积比进行混合；振荡离心后，收集中间固体层；(3)多肽的分离：Sevage试剂分离的多肽层，用70％甲醇‑水溶液溶解后过滤，应用制备型C18柱进行初步分离，流动相为甲醇甲酸水溶液，甲醇体积浓度为60％～80％，甲酸体积浓度为0.1％～1.0％，优选70％甲醇与0.5％甲酸，流速为7～15mL/min，优选流速为10mL/min，检测波长为240～300nm，优选254nm与277nm双波长检测，收集多肽部分(保留时间为12～18min，优选15min)；干燥后用0.1～3.0g/ml80:20的乙腈水溶液：200mM醋酸铵溶解，应用HILIC半制备柱进行最终分离，流动相流速为5mL/min，，检测波长为240～300nm，优选254nm与277nm双波长检测，收集多肽部分分离后得到牛膝多肽单体及其相应的糖肽，干燥后得到牛膝多肽单体。