[发明专利]一种鸡成骨细胞体外分离培养方法在审
| 申请号： | 201711161552.0 | 申请日： | 2017-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN107699542A | 公开（公告）日： | 2018-02-16 |
| 发明（设计）人： | 郭双双;李叶涵;丁斌鹰;侯永清;易丹 | 申请（专利权）人： | 武汉轻工大学 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京思创大成知识产权代理有限公司11614 | 代理人： | 高爽 |
| 地址： | 430023 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，涉及一种鸡成骨细胞体外分离培养方法。该方法包括以下步骤(1)选用种蛋，无菌条件下取鸡胚的颅骨；(2)将颅骨置于胰蛋白酶溶液中孵育；(3)将颅骨剪成组织块，加入II型胶原酶溶液孵育；(4)用含有胎牛血清的培养基终止消化，取消化液；(5)将消化液离心弃去上清液，用含有胎牛血清、青霉素和链霉素的培养基重悬沉淀物，混匀后移入细胞培养瓶中；(6)采用差速贴壁的方法去除成纤维细胞，将未贴壁的细胞悬液转移至另一细胞培养瓶中培养；(7)定期更换培养液，待原代成骨细胞长满，用胰蛋白酶消化，差速贴壁纯化后传代。本发明的方法操作简便、细胞得率和纯度高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 鸡成骨 细胞 体外 分离 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种鸡成骨细胞体外分离培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)选用15‑16胚龄的种蛋，无菌条件下取鸡胚的颅骨，剥离结缔组织，刮除骨膜直至颅骨发白，用含有抗生素的缓冲溶液洗涤；(2)将洗涤后的颅骨置于胰蛋白酶溶液中，于37℃培养箱中孵育，弃去消化液，用缓冲溶液洗涤；(3)将步骤(2)处理后的颅骨剪成0.8‑1.2mm3的组织块，并转移至离心管中，加入II型胶原酶溶液，于37℃培养箱中孵育；(4)用含有胎牛血清的培养基终止消化，使未消化的大块骨组织沉降，取消化液；(5)将所述消化液离心弃去上清液，用含有胎牛血清、青霉素和链霉素的培养基重悬沉淀物，混匀后移入T25细胞培养瓶中；(6)采用差速贴壁的方法去除成纤维细胞，在37℃、5％CO2培养箱中培养25‑35min后，弃去贴壁的成纤维细胞，将未贴壁的细胞悬液转移至另一T25细胞培养瓶中，置于培养箱中培养；(7)定期更换培养液，待原代成骨细胞长满，用胰蛋白酶消化，差速贴壁纯化后传代。
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