[发明专利]PK15细胞驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺在审
| 申请号： | 201711098900.4 | 申请日： | 2017-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN108570445A | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 蔡仕君;王嘉琪 | 申请（专利权）人： | 甘肃健顺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N7/00 |
| 代理公司： | 北京律智知识产权代理有限公司 11438 | 代理人： | 于宝庆;崔香丹 |
| 地址： | 730070 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明涉及PK15细胞驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺。具体而言，本发明涉及驯化PK15细胞使其适应无血清悬浮培养，并以其为宿主细胞，采用二阶培养接毒方式生产能在悬浮PK15细胞上病变或有敏感性的病毒，即，细胞长至2.0～20.0×106细胞/mL时，用生产培养基稀释1～5倍，使密度在1.0～10.0×106细胞/mL间，然后接毒，或在稀释前接毒。本发明的悬浮PK15细胞适应在无血清和化学成分确定的培养基中悬浮生长，其二阶病毒生产工艺简单，易放大，不换液，培养基利用率高；生产和生长培养基可相同或不同，二者按照比例混合，即可使细胞二次生长并促进病毒表达。 | ||
| 搜索关键词： | 悬浮 病毒生产 驯化 二阶 细胞 无血清 稀释 培养基利用率 生产培养基 生长培养基 病毒表达 成分确定 二次生长 宿主细胞 悬浮培养 培养基 换液 病变 放大 病毒 生产 生长 | ||
【主权项】：
1.一种悬浮PK15细胞疫苗生产的二阶培养方法，其包含如下步骤：6)细胞生长：悬浮PK15细胞在生长培养基中生长至2.0×106细胞/mL～20.0×106细胞/mL；7)接毒：接毒量在10‑1～10‑5MOI之间，或者在步骤3)之后按照此接毒量接毒；8)稀释/补加生产培养基：用生产培养基稀释1～5倍，稀释后细胞密度到1.0×106细胞/mL～10.0×106细胞/mL；9)二次生长：细胞二次生长；10)任选地，收获病毒液纯化制苗。
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