[发明专利]用液相色谱串联质谱技术检测儿茶酚胺及代谢产物的方法

摘要

本发明公开一种用液相色谱串联质谱技术检测儿茶酚胺及代谢产物的方法，该方法可以高灵敏度地、特异性地一次性检测出儿茶酚胺及其代谢产物，包括MN和NMN(协会指南中首推的指标)、E和NE(起辅助诊断作用)以及DA和3‑MT，可以用于各种类型的PPGL进行诊断,具有非常高的灵敏度和特异性，灵敏度和特异性可分别达到100％和97.2％。

主权项

一种用液相色谱串联质谱技术检测儿茶酚胺及代谢产物的方法，其中所述儿茶酚胺及其代谢产物包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、变肾上腺素(MN)、变去甲肾上腺素(NMN)和3‑甲氧酪胺(3‑MT)，其特征在于：所述方法包括：(1)将250μL的醋酸铵溶液、100μL的儿茶酚胺及其代谢物的内标溶液、200μL的生物样本，充分混匀后形成待测样本溶液，待用；(2)将N个浓度不同的200μL儿茶酚胺及其代谢产物的标准品溶液分别与250μL的醋酸铵溶液、100μL的儿茶酚胺及其代谢物的内标溶液混匀形成N个标准品混合溶液，待用；其中N为4至10的整数；(3)将弱阳离子交换96孔固相提取板分别用200μL甲醇和水进行预处理；然后分别将以上所述的待测样品溶液和N个标准品混合溶液加入经过预处理的各孔，待样品加载完成后，分别用200μL的醋酸铵溶液和乙腈/异丙醇混合溶液清洗样品孔，然后用2份50μL的含有甲酸的乙腈水溶液洗涤样品孔，收集洗脱液至接收板中；取10μL洗脱液进入LC‑MS/MS系统分析；其中，色谱条件为：色谱柱为Xbridge BEH Amide，柱温35℃；流动相A:100％水，含有10mM甲酸铵；流动相B：85％乙腈、15％水，含有10mM甲酸铵，流速：0.4ml/min；按梯度洗脱；质谱条件为：电喷雾离子源，正离子扫描，离子源喷雾电压：3600V，离子传输管温度：350℃，雾化温度：330℃；在将N个含有内标的儿茶酚胺及其代谢物的标准品混合溶液通过固相提取板处理，进入LC‑MS/MS分析后，将所述标准品混合溶液中的标准品出峰面积同内标出峰面积的比值同所述标准品溶液的浓度做线性回归，分别得到肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、变肾上腺素(MN)、变去甲肾上腺素(NMN)和3‑甲氧酪胺(3‑MT)6种化合物的标准曲线；然后，根据待测样本中的上述6种化合物的出峰面积同内标出峰面积的比值，通过标准曲线计算生物样本中所述6种目标化合物的浓度。