[发明专利]一种体外酶反应生产D-(-)-乙偶姻的方法有效
| 申请号： | 201710972637.0 | 申请日： | 2017-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN107653259B | 公开（公告）日： | 2018-07-13 |
| 发明（设计）人： | 陈涛;崔真真;赵玉姣;毛雨丰;王智文 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P7/26;C12N15/54;C12N9/88;C12N9/10 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外酶反应生产D‑(‑)‑乙偶姻的方法，步骤为：(1)将载体pET28a与α‑乙酰乳酸合成酶编码基因alsS连接得到pET28a‑alsS并导入大肠杆菌，发酵，纯化，浓缩，得α‑乙酰乳酸合成酶浓缩液；将载体pET28a与编码α‑乙酰乳酸脱羧酶基因alsD连接得到pET28a‑alsD并导入大肠杆菌，发酵，纯化，浓缩，得到α‑乙酰乳酸脱羧酶浓缩液；(2)将上述两种浓缩液、丙酮酸钠、Mg2+和硫胺素焦磷酸混合均匀，反应，得到D‑(‑)‑乙偶姻。本发明以廉价的丙酮酸钠为底物，实现高附加值手性D‑(‑)‑乙偶姻的体外高效生产，产物手性纯度高。 | ||
| 搜索关键词： | 乙偶姻 浓缩液 乙酰乳酸合成酶 乙酰乳酸脱羧酶 大肠杆菌 丙酮酸钠 酶反应 种体 发酵 浓缩 编码基因 产物手性 高效生产 焦磷酸 硫胺素 底物 手性 体外 基因 生产 | ||
【主权项】：
1.一种体外酶反应生产D‑(‑)‑乙偶姻的方法，其特征是包括如下步骤：(1)将蛋白质表达载体pET28a与α‑乙酰乳酸合成酶编码基因alsS连接得到质粒pET28a‑alsS，将所述质粒pET28a‑alsS导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中得到菌株BL21‑1，对菌株BL21‑1培养发酵表达α‑乙酰乳酸合成酶，纯化，浓缩，得到α‑乙酰乳酸合成酶溶液；将蛋白质表达载体pET28a与α‑乙酰乳酸脱羧酶编码基因alsD连接得到质粒pET28a‑alsD，将所述质粒pET28a‑alsD导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中得到菌株BL21‑2，对菌株BL21‑2培养发酵表达α‑乙酰乳酸脱羧酶，纯化，浓缩，得到α‑乙酰乳酸脱羧酶溶液；(2)将α‑乙酰乳酸合成酶、α‑乙酰乳酸脱羧酶、丙酮酸钠、Mg2+和硫胺素焦磷酸混合均匀，反应，得到D‑(‑)‑乙偶姻；所述α‑乙酰乳酸合成酶编码基因alsS，Genbank登陆号为936852；所述α‑乙酰乳酸脱羧酶编码基因alsD，Genbank登陆号936857。
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