[发明专利]一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产灵芝酸的方法

摘要

本发明公开了一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产灵芝酸的方法，包括利用静电自组装法将灵芝灵芝原生质体包裹在有机‑无机复合脂质形成的稳定硅质体中；将壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯完全溶解于乙酸溶液，加入甘油，再加入硅质体，通过静电纺丝制得纳米纤维膜，将其成卷装入层析柱中；配制乳糖乳糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和酵母粉的混合溶液，经过滤除菌后，以一定流速流经层析柱，同时层析柱下部通气，经检测流出液中含有灵芝酸。本发明固定化细胞的方法具有高效、抗染菌、产率高、产物浓度高的特点，便于后续产物分离和纯化。

主权项

1.一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产灵芝酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一：制备灵芝原生质体硅质体：称取质量比为0.1～0.2:1～3的有机-无机复合脂质与灵芝原生质体；将有机-无机复合脂质溶于三氯甲烷中，蒸发除去三氯甲烷得到类脂质薄膜；灵芝原生质体悬浮于甘露醇水溶液中，然后加入到所得类脂质薄膜中，搅拌混匀并迅速加热到45～50℃，热激10～30s同时水浴超声，冷却至4℃后静置，经脂质体挤出器挤出，得到灵芝原生质体硅质体悬液；/n步骤二：制备纳米纤维膜：取壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯溶解于乙酸水溶液中，加入甘油，再加入步骤一制得的灵芝原生质体硅质体悬液，搅拌混匀，通过静电纺丝制得纳米纤维膜，将其成卷填入层析柱中，层析柱中心留空；/n步骤三：配制乳糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和酵母粉的混合水溶液，经过滤除菌后，流经步骤二制备的层析柱，收集流出液，即得；/n步骤一中，所述灵芝原生质体通过如下步骤获得：/n步骤a：取灵芝菌体用无菌水洗涤，离心取沉淀；/n步骤b：配制酶解液：分别取步骤a沉淀质量2～4％的溶壁酶、蜗牛酶、纤维素酶和崩溃酶，以质量体积比0.1:5～10g/mL加入到含有0.3～0.5mol/L KCl和0.2～0.4mol/L MgSO