[发明专利]基于阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法

摘要

本发明涉及阳离子脂质体非病毒基因载体领域，具体涉及基于阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法。本发明通过琼脂糖凝胶电泳技术定性定量的分析阳离子脂质体与基因的结合过程；通过构建荧光共振能量转移体系，采用荧光光谱技术及停流光谱技术来检测阳离子脂质体与基因之间的结合过程，拟合其结合动力学曲线符合线性方程，实现从宏观和微观检测阳离子脂质体‑基因结合动力学的目的。本发明公开的阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法，适用于研究带正电荷的阳离子脂质体与基因的体外结合动力学过程，拓宽了琼脂糖凝胶电泳技术、荧光光谱技术和停流光谱技术的应用，并为阳离子脂质体基因载体递送机制研究及进一步应用研究提供理论基础。

主权项

一种阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)制备阳离子脂质体/基因复合物，阳离子脂质体与基因的质量比为8：1～1：1，将上述复合物在0～70min进行琼脂糖凝胶电泳实验，通过琼脂糖凝胶电泳成像系统软件定量分析阳离子脂质体结合基因的量；(2)采用荧光染料分别标记阳离子脂质体与基因，按阳离子脂质体与基因的质量比8：1～1：1制备阳离子脂质体/基因复合物，构建荧光共振能量转移体系，采用荧光光谱仪检测阳离子脂质体与基因结合0～70min内复合物的发光强度；(3)将核酸染料与基因结合，构建FRET体系，加入阳离子脂质体使其与核酸染料竞争结合基因，采用停流光谱仪检测阳离子脂质体与基因在0‑200s内的瞬时结合动力学，得到结合动力学曲线，通过停流光谱仪分析软件进行线性拟合，得到结合动力学轨迹符合线性方程y＝‑0.0004x+1.3657；其中，x代表结合时间，y代表结合后荧光变化，用电压表示。