[发明专利]春雷霉素在柑橘中的检测方法

摘要

本发明提供春雷霉素在柑橘中的检测方法，包括：柑橘分离、柑橘橘皮提取、柑橘橘皮净化、柑橘橘肉提取、柑橘橘肉净化，或者柑橘全果提取、柑橘全果净化；测定，添加回收率试验，测定最小检出量，确定最低检测浓度。本方法的前处理过程相对简单，回收率高，重复性好，净化分离效果好，而且最低检测浓度比较低，适合于春雷霉素在柑橘全果、橘肉、橘皮中的分析检测。

主权项

春雷霉素在柑橘中的检测方法，其特征是，包括以下步骤：(1)柑橘分离：将柑橘全果分离为柑橘橘肉和柑橘橘皮；(2)柑橘橘肉前处理：(2.1)柑橘橘肉提取：称取5g柑橘橘肉样品，置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取后在4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL上述相同的提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化；(2.2)柑橘橘肉净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5％氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用2mL定容液将洗脱液溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；(3)柑橘橘皮前处理：(3.1)柑橘橘皮提取：称取5g柑橘橘皮样品置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取后4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL上述相同的提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化；(3.2)柑橘橘皮净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5％氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用2mL定容液溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；或者，以步骤(4)替代步骤(1)‑(3)；(4)柑橘全果前处理：(4.1)柑橘全果提取：称取5g柑橘全果样品置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取液4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL上述相同的提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化；(4.2)柑橘全果净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5％氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用2mL定容液溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；(5)测定：用配制0.005、0.010、0.020、0.051、0.10和0.20mg/L春雷霉素系列标准工作溶液，分别进样1μL，获得UPLC‑MS/MS的响应值，以浓度‑峰面积/峰高绘制春雷霉素标准曲线；(6)回收率试验：根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品中分别设定0.05、0.1和1.0mg/kg三档添加浓度，每档浓度重复添加5次，进行添加回收率试验，得到柑橘全果、柑橘橘肉和橘皮样品中春雷霉素的添加回收率和相对标准偏差；(7)采用超高效液相色谱串联质谱仪测定春雷霉素在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品的最小检出量；(8)根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，以及按春雷霉素最低添加浓度0.05mg/kg的柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，得出春雷霉素在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品中的最低检测浓度。