[发明专利]能敲低内源性PD-1表达的CIK及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201710645459.0 | 申请日： | 2017-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN107312800B | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 袁绍鹏;占顺利;高磊 | 申请（专利权）人： | 北京舜雷科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;张立娜 |
| 地址： | 100036 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种能敲低内源性PD‑1表达的CIK及其制备方法与应用。本发明提供了制备能敲低内源性PD‑1表达的CIK细胞制剂的方法，包括：A)利用细胞因子体外诱导PBMC分化为CIK；B)向步骤A)所得CIK中转入能敲低内源性PD‑1表达的载体，培养13‑16天后收获细胞，从而制得所述能敲低内源性PD‑1表达的CIK细胞制剂；所述能敲低内源性PD‑1表达的载体上含有多个串联的靶向PD‑1的miRNA的编码基因；所述多个为2‑30个。实验结果表明，该载体可以大大降低CIK细胞中内源PD‑1的表达水平，从而显著的提高了CIK细胞的肿瘤杀伤活性。 | ||
| 搜索关键词： | 能敲低 内源 pd 表达 cik 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种制备能敲低内源性PD-1表达的CIK细胞制剂的方法，包括如下步骤：/n(A)利用细胞因子体外诱导PBMC分化为CIK；/n(B)向步骤(A)所得CIK中转入能敲低内源性PD-1表达的载体，培养后收获细胞，从而制得所述能敲低内源性PD-1表达的CIK细胞制剂；/n所述能敲低内源性PD-1表达的载体为慢病毒载体；/n所述能敲低内源性PD-1表达的载体上含有13个串联的靶向PD-1的miRNA的编码基因；所述13个串联的靶向PD-1的miRNA的编码基因分别如下：/n(1)miRNA-PD1-244：核苷酸序列如序列表中序列1的第2391-2449位所示；/n(2)miRNA-PD1-373：核苷酸序列如序列表中序列1的第2529-2587位所示；/n(3)miRNA-PD1-716：核苷酸序列如序列表中序列1的第2667-2725位所示；/n(4)miRNA-PD1-791：核苷酸序列如序列表中序列1的第2805-2863位所示；/n(5)miRNA-PD1-801：核苷酸序列如序列表中序列1的第2943-3001位所示；/n(6)miRNA-PD1-811：核苷酸序列如序列表中序列1的第3081-3039位所示；/n(7)miRNA-PD1-818：核苷酸序列如序列表中序列1的第3219-3277位所示；/n(8)miRNA-PD1-904：核苷酸序列如序列表中序列1的第3357-3415位所示；/n(9)miRNA-PD1-988：核苷酸序列如序列表中序列1的第3495-3553位所示；/n(10)miRNA-PD1-1466：核苷酸序列如序列表中序列1的第3633-3691位所示；/n(11)miRNA-PD1-1483：核苷酸序列如序列表中序列1的第3771-3829位所示；/n(12)miRNA-PD1-1697：核苷酸序列如序列表中序列1的第3909-3967位所示；/n(13)miRNA-PD1-1960：核苷酸序列如序列表中序列1的第4047-4105位所示；/n所述能敲低内源性PD-1表达的载体的序列为序列表中序列1或序列2所示。/n
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