[发明专利]一种从重度污染的细胞培养液中挽救细胞的方法

摘要

本发明公开了一种从重度污染的细胞培养液中挽救细胞的方法，包括如下步骤a、取1瓶含有被细菌重度污染的细胞培养液，用缓冲液冲洗然后加入左氧氟沙星然后培养；b、取完成步骤a的培养体系,用缓冲液冲洗，然后加入左氧氟沙星,然后培养；c、取完成步骤b的培养体系，用缓冲液冲洗并且吹打，然后丢掉PBS缓冲液，然后加入左氧氟沙星，然后在CO2的培养箱培养；d、取完成步骤c的培养体系，用缓冲液冲洗2次，加入胰蛋白酶液，得到细胞沉淀，然后将细胞沉淀和常规培养液加入到培养瓶中进行培养；本发明使得重度污染的细胞恢复细胞活性，完成细胞传代。

主权项

一种从重度污染的细胞培养液中挽救细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：a、取1瓶含有被细菌重度污染的细胞培养液，丢弃除贴壁细胞以外的上层被污染的细胞培养液，用无菌PBS缓冲液冲洗3次并且吹打，然后丢掉无菌PBS缓冲液，然后加入500μg/ml的左氧氟沙星培养液250μl使得左氧氟沙星培养液覆盖培养瓶底部，然后将培养瓶置于CO2的培养箱培养；b、取完成步骤a的培养体系,吸弃除贴壁细胞以外的液体，用无菌PBS缓冲液冲洗3次并且吹打，然后丢掉无菌PBS缓冲液，然后加入200μg/ml的左氧氟沙星培养液3ml,然后在CO2的培养箱培养；c、取完成步骤b的培养体系，吸弃除贴壁细胞以外的液体，用无菌PBS缓冲液冲洗3次并且吹打，然后丢掉无菌PBS缓冲液，然后加入100μg/ml的左氧氟沙星培养液3ml，然后在CO2的培养箱培养；d、取完成步骤c的培养体系，吸光培养瓶中的培养液，用无菌PBS缓冲液冲洗2次，加入体积为1ml到2ml的0.25％胰蛋白酶液，静置2mim‑10min，吸去胰蛋白酶液，加入常规培养液2ml，用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液，把细胞悬液放入离心管中，然后在离心机内进行离心，离心后弃上清，得到细胞沉淀，然后将细胞沉淀和3ml常规培养液加入到培养瓶中，然后置于CO2的培养箱进行正常培养；所述常规培养液为含体积比为8％的胎牛血清的RPMI‑1640培养基；所述细胞培养液为一株贴壁生长的鼻咽癌HK‑1细胞培养液。