[发明专利]一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法

摘要

本发明涉及一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法；所述胶体金试纸包括反应膜、样本垫、结合物释放垫、吸水垫和背衬；所述反应膜上具有包被二乙烯三胺五乙酸‑载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区，所述结合物释放垫包被二乙烯三胺五乙酸单克隆抗体‑胶体金标记物；检测时，将样品滴入试剂卡孔内，当二乙烯三胺五乙酸及其螯合物在样品中浓度低时，胶体金抗体在层析过程中会被固定在反应膜上的二乙烯三胺五乙酸偶联物结合，在测试区质控区内会出现各一条红色条带；浓度高时，则反之；本发明能准确、快速检测鸡肉、猪肉、尿液、蜂蜜等动物源性食品、洗涤剂及水环境中二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的残留含量。

主权项

1.一种检测二乙烯三胺五乙酸及其螯合物的胶体金试纸，包括反应膜、样本垫、结合物释放垫、吸水垫和背衬，其特征在于：所述反应膜上具有包被二乙烯三胺五乙酸‑载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区，所述结合物释放垫包被二乙烯三胺五乙酸单克隆抗体‑胶体金标记物；所述的二乙烯三胺五乙酸‑载体蛋白偶联物为二乙烯三胺五乙酸‑牛血清白蛋白偶联物或二乙烯三胺五乙酸‑钥孔血蓝蛋白偶联物；其制备方法为：取0.8‑20mg p‑NH₂‑Bn‑DTPA溶于50μL二甲基亚砜，配制16‑400mg/mL的 p‑NH₂‑Bn‑DTPA；取2.0‑20.0 mg钥孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白溶于1mL HEPES缓冲溶液或碳酸盐缓冲液，配制成2‑20mg/mL的载体蛋白溶液；将1mL 1%戊二醛溶液逐滴加入 p‑NH₂‑Bn‑DTPA溶液中，室温放置过夜以活化氨基；将活化的半抗原溶液逐滴加入到1mL 2‑20 mg/mL的载体蛋白溶液中，于4℃或室温、pH7.5‑10.5条件下振荡反应24h；用超滤或透析的方法去除未反应的低分子物质，得到二乙烯三胺五乙酸‑钥孔血蓝蛋白偶联物或二乙烯三胺五乙酸‑牛血清白蛋白偶联物；所述二乙烯三胺五乙酸单克隆抗体‑胶体金标记物中的二乙烯三胺五乙酸单克隆抗体是以二乙烯三胺五乙酸‑载体蛋白偶联物作为免疫抗原免疫试验动物后制备获得。