[发明专利]一种快速区分5种小鼠呼吸道病原的多重液相基因芯片检测引物、试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种快速区分5种小鼠呼吸道病原的多重液相基因芯片检测引物、试剂盒及方法。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病毒。本发明方法，能够同时对小鼠肺炎病毒、汉坦病毒、仙台病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、肺支原体进行检测，而且特异性强，灵敏度高，重复性好。与传统检测方法相比，本发明方法实现了对同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测，样本用量少，操作简单、快速，可大大降低检测成本。

主权项

1.一种用于多重液相基因芯片检测中快速区分5种小鼠呼吸道病原的引物组合物，其特征在于：所述引物组合物由5对引物组成，其中用于检测小鼠肺炎病毒的引物的核苷酸序列如下所示：A1：5’‑ AGATCACAGAGCCCGTCAAAAT ‑3’；A2：5’‑ GCATATAACATCCAATACGAGTTTGAA ‑3’；用于检测汉坦病毒的引物的核苷酸序列如下所示：B1：5’‑GGACACAATCAATGGGGATACAAC‑3’；B2：5’‑CCATATCATCCCCTAAGTGGAA‑3’；用于检测仙台病毒的引物的核苷酸序列如下所示：C1：5’‑CCCAGCCATATACTCAGTCGTGC‑3’；C2：5’‑TCCACAACTTTTGTGACAGGACAC‑3’；用于检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的引物的核苷酸序列如下所示：D1：5’‑GAGTCCAGAAGCTTTCTGATGTCAT‑3’；D2：5’‑CAAGTATTCACACGGCATGGAT‑3’；用于检测的鼠肺支原体的引物的核苷酸序列如下所示：E1：5’‑AGCGTTTGCTTCACTTTGAA‑3’；E2：5’‑GGGCATTTCCTCCCTAAGCT‑3’；其中引物A1、B1、C1、D1和E1的5’端还通过间隔臂连接有tag序列，所述tag序列分别为：引物A1的tag序列为：5’‑TACTTCTTTACTACAATTTACAAC ‑3’；引物B1的tag序列为：5’‑TACTTAAACATACAAACTTACTCA ‑3’；引物C1的tag序列为：5’‑CTAAACATACAAATACACATTTCA‑3’；引物D1的tag序列为：5’‑ CACTACACATTTATCATAACAAAT ‑3’；引物E1的tag序列为：5’‑ ACTTATTTCTTCACTACTATATCA ‑3’；引物A2、B2、C2、D2和E2的5’端添加有生物素标记。