[发明专利]同时鉴别H5亚型禽流感病毒及其NA亚型的多重PCR引物组、试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了同时鉴别H5亚型禽流感病毒及其NA亚型的多重PCR引物组、试剂盒和检测方法。本发明针对禽流感病毒的M、H5、N1、N2、N6和N8基因6个基因建立的分型及检测引物组合物如SEQ ID NO1～12所示。本发明引物组合物及试剂盒可同时鉴别H5亚型禽流感病毒及其NA亚型，特异性强，灵敏度高，交叉反应小，重复性好，通过多重PCR扩增检测，可通过直观的特征条带的判断，来区分不同NA亚型的H5禽流感病毒。本发明能够大大减少检测成本，并且操作简单，用时简短，对H5亚型禽流感病毒的流行病毒调查及防控，保障养禽业的健康持续发展具有重要意义。

主权项

同时鉴别H5亚型禽流感病毒及其NA亚型的多重PCR引物组合物，其核苷酸序列分别如下所示：针对禽流感病毒M基因的引物：MU：5’‑TTCTAACCGACGTCGAAAC‑3’；ML：5’‑TTAGTCAGAGTTGACARGAT‑3’；针对禽流感病毒H5基因的引物：H5U：5’‑ATGAACACTCARTATGAGG‑3’；H5L：5’‑GCATTATCCYTAATCTGTAG‑3’；针对禽流感病毒N1基因的引物：N1U：5’‑TTCGAGTCTGTTGCTTGGT‑3’；N1L：5’‑GGAGTATTCCTCATAGTGAT‑3’；针对禽流感病毒N2基因的引物：N2U：5’‑CAATTGGCTCTGYTTGTCT‑3’；N2L：5’‑TGGTYCCCTGYCCAATTGC‑3’；针对禽流感病毒N6基因的引物：N6U：5’‑TGCAATCAGAATAGGTGAGG‑3’；N6L：5’‑TGCTTGTGTGCGTCATCRT‑3’；针对禽流感病毒N8基因的引物：N8U：5’‑TTGATGCTGTRGCATGGTC‑3’；N8L：5’‑CATGCGACTAGTGCATGAAC‑3’；上述碱基R＝A/G，Y＝C/T。