[发明专利]一种检测嵌合抗原受体或基因修饰的T细胞受体表达的方法和应用有效
| 申请号： | 201710464896.2 | 申请日： | 2017-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN107254489B | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 韦丹;付苏雷;连杰;赵礼军;李德志 | 申请（专利权）人： | 河南省华隆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C07K14/705;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 453000 河南省新*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及免疫学和分子生物学领域，具体涉及一种检测嵌合抗原受体或基因修饰的T细胞受体表达的方法和应用，所述方法主要包括以下步骤：(1)将包装好的CAR或TCR慢病毒侵染贴壁细胞或悬浮细胞，获得表达CAR或TCR的稳定转染贴壁细胞或悬浮细胞；(2)将贴壁细胞铺板，待贴壁细胞的融合度达到70‑90％时，加入相应的悬浮细胞；(3)继续培养并收集上清，对悬浮在上清中的细胞进行计数并观察悬浮细胞与贴壁细胞结合现象。本发明的检测嵌合抗原受体或基因修饰的T细胞受体表达的方法不但能判定CAR或TCR是否正确表达，还能证明已表达的CAR或TCR能否与相应的肿瘤抗原特异性结合，进一步提高了CAR或TCR表达检测的准确率，为肿瘤免疫治疗提供进一步的保障。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 嵌合 抗原 受体 基因 修饰 细胞 表达 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种检测嵌合抗原受体或基因修饰的T细胞受体表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将包装好的CAR或TCR慢病毒侵染贴壁细胞或悬浮细胞，获得表达CAR或TCR的稳定转染贴壁细胞或悬浮细胞；(2)将贴壁细胞铺板，待贴壁细胞的融合度达到70‑90％时，加入悬浮细胞；(3)继续培养并收集上清，对悬浮在上清中的细胞进行计数并观察悬浮细胞与贴壁细胞结合现象；其中，当CAR或TCR靶向的肿瘤抗原表达于悬浮细胞时，步骤(2)所述贴壁细胞为步骤(1)所述的表达CAR或TCR的稳定转染的贴壁细胞，所述悬浮细胞为CAR或TCR靶向的肿瘤抗原表达的悬浮细胞；当CAR或TCR靶向的肿瘤抗原表达于贴壁细胞时，步骤(2)所述贴壁细胞为CAR或TCR靶向的肿瘤抗原表达的贴壁细胞，所述悬浮细胞为步骤(1)所述的表达CAR或TCR的稳定转染的悬浮细胞。
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