[发明专利]在毕赤酵母中高效表达重组猪表皮生长因子的方法在审
| 申请号： | 201710452655.6 | 申请日： | 2017-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN107365374A | 公开（公告）日： | 2017-11-21 |
| 发明（设计）人： | 李巨浪;伊芬娜;刘璨颖 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C07K14/485 | 分类号： | C07K14/485;C12N15/12;C12N15/81 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司44100 | 代理人： | 许英伟 |
| 地址： | 528000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种在毕赤酵母中高效表达重组猪表皮生长因子的方法，其包括如下步骤(1)构建重组猪EGF表达载体；(2)用重组质粒pJ912‑pEGF电转化毕赤酵母X‑33；(3)生物发酵表达猪EGF。本发明的方法能够在毕赤酵母中高效表达重组猪表皮生长因子。 | ||
| 搜索关键词： | 酵母 高效 表达 重组 表皮 生长因子 方法 | ||
【主权项】：
一种在毕赤酵母中高效表达重组猪表皮生长因子的方法，其包括如下步骤：(1)构建重组猪EGF表达载体pJ912‑pEGF：人工合成猪EGF核苷酸序列，在所述猪EGF核苷酸序列的5’端和3’端分别加入SmalI和PstI酶切位点，得到猪EGF合成产物，用SmalI和PstI双酶切表达载体pJ912并进行回收，将回收后的表达载体pJ912与所述猪EGF合成产物用T4DNA连接酶连接以构建重组质粒pJ912‑pEGF；(2)用重组质粒pJ912‑pEGF电转化毕赤酵母X‑33：将重组质粒pJ912‑pEGF的DNA用SwaI酶切，线性化，用苯酚‑氯仿抽提和乙醇沉淀法进行纯化；纯化后的线性质粒DNA溶解于10ul无核酸酶水中；再用纯化后的线性质粒DNA电转化毕赤酵母X‑33；得到重组子。(3)生物发酵表达猪EGF。
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