[发明专利]载药杂化纳米粒子及其制备方法

摘要

本发明公开了一种载药杂化纳米粒子，其制备方法包括以下步骤：(1)叠氮化三缩酮化合物的制备；(2)炔丙胺修饰肝素钠的制备；(3)炔丙胺修饰肝素钠接枝叠氮化三缩酮化合物；(4)载药杂化纳米粒子的制备。本发明以天然的聚合物肝素作为纳米粒子的骨架材料，其肝素是构成具有很好的生物安全性，通过特定的制备过程，制备出的载药杂化纳米粒子，其载药杂化纳米粒子的粒径在EPR效应范围内，可实现被动靶向，在过热环境下的响应性，可实现其在肿瘤细胞内高选择性的快速释药，因此制备出的载药杂化纳米粒子具有生物相容性好、其安全性高、无毒副作用等特点。

主权项

载药杂化纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)叠氮化三缩酮化合物的制备称取2,2‑二甲氧基‑苯基苯乙酮，加热使其融化，加入季戊四醇三烯丙基醚和硫代甘油，搅拌溶解后，在365nm紫外灯下搅拌反应1‑2h，然后加甲醇溶解，再加石油醚，搅拌静置后取甲醇层，除去溶剂，得到中间物1；中间体1和2,2‑二甲氧基丙烷混合，加入对甲苯磺酸水合物，于30℃‑40℃混合搅拌反应12‑16h，加入三乙胺，继续反应0.5h后过柱层析，除去溶剂得中间物2；中间物2和氢化钠溶于无水DMF中，于氮气保护下冰水浴反应1‑1.5h后逐滴加入1，6‑二溴己烷，反应24‑26h后，逐滴加入甲醇以淬灭反应，过滤，水洗，用乙酸乙酯萃取后柱层析分离得中间物3；中间物3溶于无水DMF中后加入叠氮化钠，于75‑85℃下搅拌反应48‑50h，用乙酸乙酯溶解，然后水洗，取有机相干燥后得到叠氮化三缩酮化合物；其中，季戊四醇三烯丙基醚、硫代甘油和2,2‑二甲氧基‑苯基苯乙酮的摩尔比分别为0.8‑1.5:2‑4:0.01‑0.02；中间物1、2,2‑二甲氧基丙烷、对甲苯磺酸和三乙胺摩尔比为0.8‑1.5:3‑6:0.05‑0.15:0.05‑0.15；中间物2、氢化钠和1，6‑二溴己烷摩尔比为0.8‑1.2:3‑6:1‑3；中间物3和叠氮化钠的摩尔比为1:4‑7；(2)炔丙胺修饰肝素钠的制备将肝素钠、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺溶于水中，加入炔丙胺后调节溶液pH值为6‑7，室温反应24‑26h，去离子水透析72h后冷冻干燥；其中，肝素钠、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N‑羟基琥珀酰亚胺和炔丙胺质量比为0.8‑1.2:0.5‑0.65:0.3‑0.4:0.02‑0.04；(3)炔丙胺修饰肝素钠接枝叠氮化三缩酮化合物炔丙胺修饰的肝素钠、叠氮化三缩酮化合物、五水硫酸铜和抗坏血酸钠以质量比0.8‑1.2:1.2‑1.8:0.1‑0.16:0.6‑1.0混合，溶于DMSO中，氮气保护下于35‑45℃反应24‑26h，DMSO透析后再用水透析除去有机溶剂，冷冻干燥；(4)载药杂化纳米粒子的制备将溶解有抗肿瘤药物的氯仿与溶解有步骤(3)所得物的PBS溶液按体积比为1:15混合，对混合液进行超声探头作用，将得到的乳液置于黑暗环境下挥发除去溶剂中的氯仿，再加入胱胺盐酸盐、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺，交联反应24h，利用去离子水透析，除去未被包裹的抗肿瘤药物后，置于2mol/L的碳酸氢铵溶液中24h，再利用去离子水透析，最后用0.22μm的过滤器过滤收集，冷冻干燥，形成含有碳酸氢盐的载药杂化纳米粒子；其中，抗肿瘤药物和步骤(3)所得物的质量比为1‑3:8‑10；步骤(3)所得物与胱胺盐酸盐、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺的质量比为8‑12:0.8‑1.2:4‑6:2‑4。