[发明专利]一种蝎肽及其制备方法

摘要

本发明涉及一种用于戒毒、镇痛、抗癫痫、抗成瘾、抗血栓、抗肿瘤、治疗风湿、治疗类风湿、治疗关节炎的蝎肽。本发明所用的蝎肽采用特定方法制备，所制备的蝎肽纯度高达98％，收率高，蝎肽制剂溶解性好、稳定性好，安全可靠，室温下贮存期长，运输方便，疗效显著，用于生理脱毒，治愈率高。

主权项

1.一种蝎肽的制备方法，其特征在于：蝎肽的氨基酸序列为：SQE1；第1步、经过色谱得到A和B两部分；将冻干的蝎毒用0.01mol/L的氢氧化钠和磷酸二氢钾溶解，然后上样至凝胶离子交换色谱进行分离，收集A部分：凝胶离子交换色谱的具体过程为，HPLC色谱分析采用高效液相色谱仪、CXTH‑3000色谱工作站，色谱柱，SephadexTMG‑50 200mm×250mm，流速：5.0‑10.0mL·min‑1，检测波长：260nm，进样量：2mL，流动相为：A：0.01mol/L的氢氧化钠和磷酸二氢钾，B：0.01mol/L的氢氧化钠、磷酸二氢钾和1mol/L氯化钠，洗脱程序：0～10min，A；10～35min，B；得到峰A和峰B；峰A的出峰时间；5‑18min；峰B的出峰时间：27‑35min；含有峰A的洗脱液为A部分；第2步、A部分经过脱水脱盐透析袋，冷冻干燥；A部分经过脱水，聚乙二醇，透析袋脱盐，‑30℃冷冻5小时，移至冷冻干燥机，‑50℃；减压干燥36小时，得到白色粉末；第3步、白色粉末经HPLC分离纯化；具体过程为，HPLC色谱采用高效液相色谱仪，色谱柱；Chromdex 75PG，10mm×300mm，5μm，流速：0.5‑2.0mL·min‑1，检测波长：260nm，进样量：500μL，流动相为：A：水‑0.01％三氟乙酸，B：乙腈‑水‑0.01％三氟乙酸，梯度洗脱程序：0‑5min B:5％5‑10min,B:5‑20％；10‑40min；B:20‑55％；40‑45min B：55‑100％；45‑55min B：100％；55‑60min B：5％收集出峰时间；44‑46min的部分；第4步、透析袋脱水脱盐，冷冻干燥；经过脱水；聚乙二醇，脱盐，透析袋，‑30℃冷冻5小时，移至冷冻干燥机，‑50℃；减压干燥36小时，得到白色粉末；得到蝎毒单体；第5步、分子量的测定；蝎毒单体分子量的确定样品与基质CHCA混合，用基质辅助激光解析电离‑飞行时间串联质谱仪MALDI‑TOF/TOF；Ultraflextreme,Brucker,Germany；在线性模式下检测；结果显示平均分子量为6732.7686；第6步、氨基酸序列的测定；蝎毒单体样品经DTT还原和碘代乙酰胺烷基化处理后，加入胰蛋白酶酶解过夜；酶解后得到的肽段再经C18ZipTip脱盐后，与基质α‑cyano‑4‑hydroxycinnamic acid混合点板；用基质辅助激光解析电离‑飞行时间质谱仪MALDI‑TOF/TOF进行分析；原料蝎毒的制备将全蝎2kg，绞碎，匀浆，加入5升含5％醋酸的50％乙醇，低温5℃搅拌浸泡5次，过滤、离心过滤，取5次滤液，减压过滤，滤液通过D152型弱酸性阳离子树脂柱，以去离水洗脱，至洗脱液呈无色，然后用5％醋酸液洗脱；洗脱速度50ml/分；富集，合并、减压浓缩，浓缩物以氨水调pH8.0，低温5℃放置48小时，过滤、干澡，得白色沉淀物蝎毒。