[发明专利]一种检测核酸外切酶I的荧光传感方法有效
| 申请号： | 201710363009.2 | 申请日： | 2017-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN107192697B | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | 胡宇芳;张青青;杜春暖;王娇;饶家佳;郭智勇;葛国平;王邃 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 315211 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测核酸外切酶I(Exo I)的荧光传感方法，特点是具体步骤如下：(1)将阳离子共轭聚合物(CCP)与铱配合物混合，然后加入Exo I缓冲液，得到用于检测Exo I的基于CCP与铱配合物荧光共振能量转移(FRET)效应的荧光传感器体系。检测荧光强度；(2)加入单链DNA(ssDNA)到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化；(3)不同浓度的Exo I加入到步骤(2)中，检测样品中Exo I的活性，优点是第一次发明了一种特异性好、灵敏度高、检测速度快，结果准确可靠的分析传感方法用于Exo I的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光 检测 传感 核酸外切酶I 铱配合物 种检测 阳离子共轭聚合物 荧光共振能量转移 荧光传感器 检测样品 种特异性 单链DNA 缓冲液 灵敏度 分析 | ||
【主权项】：
1.一种检测核酸外切酶I‑Exo I的荧光传感方法，具体步骤如下：(1)将85～95μL浓度为3～4μM阳离子共轭聚合物CCP与0.5～2μL浓度为0.5～2mM铱配合物混合，然后加入相应体积的10×Exo I缓冲液，得到100μL用于检测Exo I的基于阳离子共轭聚合物CCP与铱配合物荧光共振能量转移FRET效应的荧光传感器体系；检测荧光强度，计算CCP在415nm的荧光强度与铱配合物在530nm的荧光强度比值；(2)加入1～3μL 5～15μM的ssDNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化，计算CCP在415nm的荧光强度与铱配合物在530nm的荧光强度比值；(3)不同浓度的Exo I加入到步骤(2)中，然后相应体积的10×Exo I缓冲液，30～40℃下温育25～35min，检测荧光强度的变化，计算CCP在415nm的荧光强度与铱配合物在530nm的荧光强度比值，获得一系列不同浓度的Exo I对应的荧光强度比值I530/I415，建立荧光强度比值I530/I415与Exo I浓度之间的定量关系；根据这个定量关系可以检测样品中Exo I的活性。
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