[发明专利]一种通过羧甲基化得到的新型抗肿瘤化合物

摘要

本发明提供了一种新型抗肿瘤化合物，以黑灵芝为原料，经过提取、精制分离、羧甲基化得到产物CM‑PSG，能够刺激巨噬细胞，明显增强巨噬细胞的吞噬能力和细胞上清中TNF‑α的蛋白表达量，使机体的免疫功能加强，进而增强抵抗疾病的能力，能够中和更多的亚油酸自由基和其他在体系中形成的自由基，减缓β‑胡萝卜素的褪色，可用于抗肿瘤。

主权项

一种通过羧甲基化得到的新型抗肿瘤化合物，其特征在于：制备方法为:(1)取干燥黑灵芝药材100g，加95％乙醇室温浸泡提取48h，过滤，重复一次，药渣于室温下置通风处晾干，然后将药渣与蒸馏水按质量体积(kg/L)比为1：20的比例混合，回流提取两次，每次提取时间依次为2h，1h，合并提取液，离心分离，减压浓缩；所得样品加入适量的95％乙醇使溶液中使得乙醇的体积分数为80％，然后进行沉淀，4℃下静置24h，离心过滤；沉淀物合并，依次以无水乙醇、无水乙醚、丙酮洗涤沉淀物，冷冻干燥得样品；取得到的干燥样品，以Sevag法除蛋白，即Sevag试剂(体积比氯仿∶正丁醇＝5∶1)和干燥样品以质量比1∶1混匀，静置，除去下层蛋白质变性层；将样品浓缩，重复除蛋白操作10次；浓缩除蛋白样品后用95％乙醇洗涤，再浓缩，冻干得粗提物样品；将粗提物样品使用透析袋透析3天，将袋内样品浓缩至小体积，冷冻干燥，得黑灵芝精提物；(2)取上述得到的黑灵芝精提物500mg，加入蒸馏水配成浓度为3～5mg/mL的溶液，离心，上清液过凝胶柱层析，使用的层析系统是Purifier 100生物大分子纯化系统，凝胶柱Hiload 26/60Superdex‑200prep grade，上样前将样品和洗脱液过0.22μm微孔滤膜以保护分离柱，洗脱液为蒸馏水，流速为2mL/min，上样体积为5mL，分部收集体积为8mL/管，紫外检测器和示差折光检测器检测(RID‑10A示差检测器)在线监测洗脱情况；取第6‑14管合并，浓缩，冷冻干燥得到黑灵芝提取物PSG，为黄色或棕色的絮状固体；(3)CM‑PSG的制备：300mgPSG样品悬浮于5mL20％NaOH和12.5mL异丙醇的混合液中，于冰浴中搅拌反应3h，然后再分别边搅拌边缓慢加入含氯乙酸的异丙醇混合溶液(由1.37g或2.63g氯乙酸，5mL20％NaOH，及12.5mL异丙醇)，于室温下反应3h，然后调至60℃继续反应1.5h。冷却至室温后，加入0.5mol/L的HCL调pH值到7，并用蒸馏水透析72小时，浓缩，浓缩液用95％乙醇沉淀，搅拌静置后4℃，4000rpm离心30min，收集沉淀，用乙醇，丙酮依次洗涤，冷冻干燥得衍生物，记为CM‑PSG。