[发明专利]利用荧光显微镜观察桔霉素免疫后牛蛙抗体和亲和的方法

摘要

本发明涉及食品安全检测技术，旨在提供一种利用荧光显微镜观察桔霉素免疫的亲和蛋白的方法。包括：取来自桔霉素抗体免疫组牛蛙和对照组牛蛙的蛋白提取液，各加入桔霉素标准品，混匀后在冰箱中静置；然后分别装入透析袋进行透析；取透析袋内的保留液滴在载玻片中央置于荧光显微镜中；使用蓝绿光激发滤板，分析荧光斑点的大小。本发明以荧光显微镜技术观察桔霉素免疫后的牛蛙血清蛋白和肌肉蛋白的形态，并通过测定荧光斑点面积来鉴定桔霉素结合蛋白。相对于传统的鉴定方法具有快速、准确、直接的特点，对牛蛙抗体和肌肉亲和蛋白的形态观察、桔霉素结合蛋白的快速筛选具有重要的实际意义。

主权项

1.利用荧光显微镜观察桔霉素免疫后牛蛙抗体和亲和的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取来自桔霉素抗体免疫组牛蛙和对照组牛蛙的蛋白提取液各1 mL，提取液中的蛋白含量为2.4~ 3.6 mg/mL；向提取液中各加入1 mL 浓度为1.5 µg/mL的桔霉素标准品，混匀后在4 ℃冰箱中静置3 h；然后分别装入透析袋，并各加入20 mL的 0.01 M、pH7.4的PBS作为透析液，在4 ℃冰箱透析13 h；（2）各取10 µL透析袋内的保留液，滴在载玻片中央并盖上盖玻片，置于荧光显微镜中；使用蓝绿光激发滤板490‑520 nm，显微镜放大倍数为40×10倍，拍摄图片比例尺为100 µm；使用Image‑Pro Plus6.0软件分析荧光斑点的大小；如免疫组血清蛋白提取液的荧光斑点面积是桔霉素标准液荧光斑点面积77倍以上，表明免疫组牛蛙的抗体蛋白质能够与桔霉素结合；如果荧光斑点面积比例不符合上述条件，表明免疫组牛蛙的抗体蛋白质不能与桔霉素结合；如免疫组肌肉亲和蛋白提取液的荧光斑点面积是桔霉素标准液荧光斑点面积6倍以上，表明免疫组牛蛙的肌肉亲和蛋白质能够与桔霉素结合；如果荧光斑点面积比例不符合上述条件，表明免疫组牛蛙的肌肉亲和蛋白质不能与桔霉素结合。