[发明专利]一种L-苹果酸钠的直接酶促转化生产方法

摘要

本发明公开了直接酶促转化生产L‑苹果酸钠的方法，该方法包括：以富马酸和钙盐为原料，在延胡索酸水合酶的催化下生产L‑苹果酸钙，然后经碳酸钠中和后，制备得到L‑苹果酸钠。本发明通过选择性地克隆表达催化正向反应的延胡索酸水合酶的编码基因片段，使上述反应平衡向L‑苹果酸盐合成的方向偏移，同时采用钙型底物进行催化，解决了底物残留导致的产品质量问题，同时，作为副产物生成的碳酸钙回收利用使得整个生产过程中无副产物排放，实现了原子的经济性转化，具有显著的工业应用价值和环境效益。

主权项

1.一种通过酶促转化直接生产L‑苹果酸钠的方法，所述方法包括以下步骤：(1)将富马酸和选自碳酸氢钙、氢氧化钙和碳酸钙中的一种或多种钙盐加入水中并搅拌混匀以进行中和反应，待所述中和反应完成后，任选调节反应体系的pH值为6.5‑7.0，得到富马酸钙悬浊液；(2)向步骤(1)得到的所述富马酸钙悬浊液中加入延胡索酸水合酶催化制剂进行酶促反应，生成L‑苹果酸钙悬浊液，其中，所述延胡索酸水合酶催化制剂选自延胡索酸水合酶或者表达所述延胡索酸水合酶的重组工程菌，所述延胡索酸水合酶为FUMA、FUMC或它们的混合物；(3)向步骤(2)得到的所述L‑苹果酸钙悬浊液中加入碳酸钠以进行中和反应，待所述中和反应完成后，得到L‑苹果酸钠和碳酸钙的混合物；(4)将步骤(3)得到的所述混合物进行固液分离，得到L‑苹果酸钠的上清液以及作为沉淀物的碳酸钙，其中，将所述L‑苹果酸钠的上清液进行处理制得固体的L‑苹果酸钠，将所述碳酸钙回收以在步骤(1)中作为钙盐循环使用。