[发明专利]一种能够合成甘草次酸的酿酒酵母工程菌的构建方法在审
| 申请号： | 201710179505.2 | 申请日： | 2017-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN106987533A | 公开（公告）日： | 2017-07-28 |
| 发明（设计）人： | 张根林;李宏彪;李春;王婷 | 申请（专利权）人： | 石河子大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12P33/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司11401 | 代理人： | 刘震 |
| 地址： | 832003 新疆维*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | 本发明属于生物化工领域，具体涉及一种能够合成甘草次酸的酿酒酵母工程菌的构建方法。所述构建方法将来源于光果甘草(Glycyrrhiza glabra)的β‑香树脂醇合酶基因GgbAS、细胞色素P450氧化酶CYP88D6和CYP72A154及来源于拟南芥(Arabidopsis thaliana)的细胞色素P450氧化还原酶CPR1和CPR2分别构建形成基因表达盒，然后共转化基因表达盒于酿酒酵母CEN.PK2‑1C中，利用酵母同源重组能力组装形成具有完整甘草次酸生物合成途径的酿酒酵母工程菌。本发明所述方法在酿酒酵母工程菌能够发酵生产甘草次酸，实现了酿酒酵母酵母中甘草次酸的人工合成。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 能够 合成 甘草 酿酒 酵母 工程 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种能够合成甘草次酸的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，首先利用来源于光果甘草的β‑香树脂醇合酶GgbAS基因(Genbank注册序列号为AB037203)、来源于乌拉尔甘草的细胞色素P450氧化酶CYP88D6基因(Genbank注册序列号为AB433179)和细胞色素P450氧化酶CYP72A154基因(Genbank注册序列号为AB558146)、以及来源于拟南芥的细胞色素还原酶CPR1基因(Genbank注册序列号为AB433179)和细胞色素还原酶CPR2基因(Genbank注册序列号为AB558146)制备获得GgbAS基因片段、CYP88D6基因片段、CYP72A154基因片段、CPR1基因片段以及CPR2基因片段，分别将上述基因片段与酵母启动子和酵母终止子通过两步重叠延伸PCR连接，得到基因表达盒FBA1p‑GgbAS‑FBA1t、PGK1p‑CYP88D6‑GMP1t、ALA1p‑CPR1‑ALA1t、ENO2p‑CYP72A154‑TYS1t和GPM1p‑CPR2‑CYC1t；然后共转化上述基因表达盒于酿酒酵母CEN.PK2‑1C中，利用酵母同源重组能力组装形成具有完整甘草次酸生物合成途径的酿酒酵母工程菌。
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