[发明专利]一种降解硫酸半乳聚糖并分析其寡糖结构的方法

摘要

本发明提供了一种降解硫酸半乳聚糖获得其寡糖的方法，并采用质谱法对寡糖结构进行分析，获得了寡糖的精确结构，克服了现有技术在分析多糖结构时的缺点。本发明采用的酸降解法经济实惠、简单易行，仅引入一种无机盐杂质，易于除去；本发明采用的质谱分析法需要样品量少、耗时短、能准确的分析半乳糖的连接方式和取代位置等结构信息。

主权项

一种降解硫酸半乳聚糖并分析其寡糖结构的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.将半乳聚糖溶于浓度为0.05mol/L的三氟乙酸溶液中，使多糖的质量百分浓度为1%，在50‑70℃下反应1‑2h；B.反应结束后，加入1‑4mol/L氢氧化钠溶液中和至PH为7，然后加入85%以上乙醇使其沉淀，离心收集上清部分，浓缩、脱盐、冻干，即得寡糖混合物；C.采用 Bio‑Gel P4 凝胶柱对寡糖混合物进行分离纯化，流动相为0.2mol/L NH4CO3溶液，流速为0.3mL/min，获得不同聚合度的半乳寡糖；D.采用负离子模式的电喷雾质谱对半乳寡糖进行分析，以N2为载气，流速为250 L/h和15 L/h，在二级质谱中，需要锥孔电压 80eV，氩气作为碰撞气体，同时为了得到最佳序列信息，碰撞能量保持在20‑50eV,寡糖样品溶于乙腈和水的体积比为1：1 的溶液中，浓度达到10‑20pmol/μL，注射10μL 进行质谱分析。