[发明专利]一种刺榆组培苗继代培养方法

摘要

本发明公开了一种刺榆组培苗继代培养方法，它按照以下步骤顺序进行：(1)刺榆外植体处理：将外植体枝条修剪、清洗，放到清水中催芽；(2)无菌苗的获得：将外植体枝条上萌发的腋芽通过消毒处理，接种到启动培养基中，获得无菌苗；(3)无菌苗的继代：将无菌苗转到继代培养基中进行继代培养，多次进行。本发明首次提供了刺榆组培快繁方法，通过添加椰子汁调节培养基中的营养成分，解决了刺榆组培苗多次继代后的黄化现象；显著提高继代培养的增殖系数；增加继代培养的继代次数，如果采用5代扩繁，1代生根交替进行的方法，理论上刺榆继代可以无限进行。降低了生产成本，为刺榆的规模化、工厂化生产提供可能。

主权项

1.一种刺榆组培苗继代培养方法，其特征在于：包括刺榆外植体处理、无菌苗的获得和无菌苗的继代，具体操作步骤如下:(1)外植体处理：将采集来的外植体进行预处理，去掉枯叶、烂叶，剪掉破损、坏死的枝条，放到1‰的洗衣粉溶液中浸泡10min，在流水下用细软的毛刷刷掉枝条表面灰尘，放到清水中进行催芽培养，每天更换一次清水，5天，枝条开始萌动，抽出新枝；(2)无菌苗的获得：当新枝长度大于3cm时，距离基部叶片0.2cm处将其剪下，贴叶柄修剪掉多余叶片，放到1％洗衣粉中浸泡5min，流水冲洗30‑60min，然后在超净工作台上用75％酒精消毒20‑30s，无菌水冲洗1‑2次，再用0.02‑0.1％升汞消毒6‑16min，无菌水冲洗5‑6次，滤纸吸干水分后，切成带一个或二个腋芽的茎尖或茎段接种到启动培养基中，7‑12d后腋芽开始萌动，形成小芽，将大于2cm的芽转接到培养基中继续培养；所述启动培养基成分为：DKW+6‑BA0.05‑2.0mg/L+椰汁10‑200mL/L+白砂糖30g/L+琼脂5.8‑6.0g/L，pH:5.9‑6.0；(3)无菌苗的继代：将诱导获得的无菌苗在启动培养基上培养2‑3代，增加无菌苗数量，挑选生长状态正常的刺榆种苗，接种到增殖培养基进行继代扩繁；利用顶芽、茎段进行繁殖，继代周期为26～30d，增殖系数可以达到7‑8；所述增殖培养基成分为：改良DKW+6‑BA0.01‑1.0mg/L+KT0.01‑1.0mg/L+椰汁10‑200mL/L+白砂糖25‑30g/L+琼脂5.8‑6.0g/L，pH:5.9‑6.0；所述步骤(3)中改良DKW培养基含有成分为：CaCl2·2H2O 134‑164mg/L；MgSO4·7H2O 666‑814mg/L；KNO3 1629‑1991mg/L；(NH4)2SO41050‑1284mg/L；KH2PO4239‑292mg/L；Na2·EDTA 40.9‑49.9mg/L；FeSO4·7H2O 30.4‑37.2mg/L；Ca(NO3)2·4H2O1771‑2165mg/L；H3BO3 4.3‑5.3mg/L；MnSO4·4H2O 30.2‑36.9mg/L；Zn(NO3)2·6H2O 15.3‑18.7mg/L；Na2Mo·4H2O 0.35‑0.43mg/L；CuSO4·5H2O 0.23‑0.28mg/L；肌醇90‑110mg/L；烟酸0.9‑1.1mg/L；盐酸硫胺素1.8‑2.2mg/L；甘氨酸1.8‑2.2mg/L。