[发明专利]一种连接反应引发的超分支滚环扩增检测miRNA的方法在审
| 申请号： | 201710162311.1 | 申请日： | 2017-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN106834508A | 公开（公告）日： | 2017-06-13 |
| 发明（设计）人： | 周翔;刘奕侬;王少儒;田沺;张小娥;黄俊捷;杨伊文 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)42222 | 代理人： | 常海涛 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种连接反应引发的超分支滚环扩增检测miRNA的方法，属于分子生物学和核酸化学领域。本发明方法主要由三部分组成；第一部分是5'端磷酸化的锁式探针的两末端与靶标miRNA互补配对后利用SplintR连接酶连接成环；第二部分是超分支滚环扩增，锁式探针成环后作为模板、靶标miRNA作为引物，在phi29 DNA聚合酶的作用下发生线性滚环扩增，通过引入二级引物，使线性滚环扩增沿着支链方向发展，达到信号进一步放大；第三部分是往滚环扩增产物中加入SYBR GREEN I染料进行检测。本发明操作简单、成本较低、体系单一、灵敏度高、无背景荧光信号干扰，适于复杂生物环境中miRNA的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 连接 反应 引发 分支 扩增 检测 mirna 方法 | ||
【主权项】：
一种连接反应引发的超分支滚环扩增检测miRNA的方法，其特征在于：主要由三部分组成；第一部分是5'端磷酸化的锁式探针的两末端与靶标miRNA互补配对后利用SplintR连接酶连接成环；第二部分是超分支滚环扩增，锁式探针成环后作为模板、靶标miRNA作为引物，在phi29 DNA聚合酶的作用下发生线性滚环扩增，通过引入二级引物，使线性滚环扩增沿着支链方向发展，达到信号进一步放大；第三部分是往滚环扩增产物中加入SYBR GREEN I染料进行检测。
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