[发明专利]一种可视化金纳米粒子探针的制备方法和应用

摘要

本发明提供一种可视化金纳米粒子探针的制备方法和应用，本发明是以腺苷适配体和MUA共同组装在金纳米粒子表面上，组装后的金纳米粒子呈网状结构，溶液呈蓝色。腺苷的加入会导致核酸适配体结构的变化，使腺苷适配体从金纳米粒子表面解离下来，同时金纳米粒子由网状结构变为自由分散结构，溶液由蓝色变为红色。向溶液中加入Cr³⁺，利用Cr³⁺与MUA中‑COOH的络合作用，可将分散后的粒子重新聚集，溶液颜色又从红色变为蓝色。本发明具有双重顺序检测腺苷和Cr³⁺的功能，且灵敏度高，选择性好，不需大型仪器，可实现原位快速检测，检测结果直观，可裸眼观察。可应用于实际生物样品中腺苷和Cr³⁺的检测。

主权项

1.一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，步骤包括：1)将50‑150mL 1‑3mM氯金酸溶液加入带有回流装置的烧瓶中，搅拌，加热到沸腾，然后快速加入5‑15mL 35‑40mM柠檬酸钠溶液，回流直到溶液变为酒红色；将烧瓶移出热源，继续搅拌，冷却至室温得到的金纳米粒子，0‑5℃下保存备用；2)分别将100‑200μM 5‑10μL巯基DNA1和DNA2与TCEP按照物质的量的比为1:20‑80混合均匀，室温放置0.5‑2小时；所述的DNA1和DNA2的序列分别是：5’‑CCCAGGTAAAAAAAAAA‑HS‑3’5’‑HS‑AAAAAAAAAAACCTTCC‑3’3)分别取步骤1)得到的金纳米粒子溶液500‑1000μL于两个玻璃管中，分别加入步骤2)处理得到的DNA1、DNA2和100‑200μM 5‑10μL MUA，加入二次水使溶液最终体积为1‑2mL，混匀，将两个玻璃管中的溶液置于暗室15‑20小时；4)向步骤3)得到的两个玻璃管中的溶液各加1‑2M Tris‑HCl pH 7.0‑7.5缓冲液5‑10μL和1‑2M NaCl溶液50‑100μL，轻轻震荡摇匀并置于暗室过夜；5)向步骤4)得到的两个玻璃管中的溶液各加1‑2M Tris‑HC pH7.0‑7.5缓冲液1‑5μL和1‑2M NaCl溶液10‑50μL，轻轻震荡摇匀并置于暗室过夜；6)分别取步骤5)得到的两个玻璃管中的溶液各200‑1000μL于两个1.5mL离心管中，置于台式离心机中以10000‑15000rpm的转速离心10‑20分钟，加入200‑1000μL含100‑200mM NaCl、15‑25mM Tris‑HCl pH 7.0‑7.5的缓冲液使金纳米粒子重新分散；7)将步骤6)得到的两种溶液混合均匀，加入1‑2μL 100‑200μΜ的腺苷适配体，使适配体与DNA的比例为0.2‑1.0；8)将步骤7)得到的溶液在50‑70℃下反应5‑20分钟，缓慢冷却至室温，并在2‑7℃下保存。