[发明专利]一种可视化金纳米粒子探针的制备方法和应用

权利要求书

1.一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，步骤包括：

1)将50-150mL 1-3mM氯金酸溶液加入带有回流装置的烧瓶中，搅拌，加热到沸腾，然后快速加入5-15mL 35-40mM柠檬酸钠溶液，回流直到溶液变为酒红色；将烧瓶移出热源，继续搅拌，冷却至室温得到的金纳米粒子，0-5℃下保存备用；

2)分别将100-200μM 5-10μL巯基DNA1和DNA2与TCEP按照物质的量的比为1:20-80混合均匀，室温放置0.5-2小时；所述的DNA1和DNA2的序列分别是：

5’-CCCAGGTAAAAAAAAAA-HS-3’

5’-HS-AAAAAAAAAAACCTTCC-3’

3)分别取步骤1)得到的金纳米粒子溶液500-1000μL于两个玻璃管中，分别加入步骤2)处理得到的DNA1、DNA2和100-200μM 5-10μL MUA，加入二次水使溶液最终体积为1-2mL，混匀，将两个玻璃管中的溶液置于暗室15-20小时；

4)向步骤3)得到的两个玻璃管中的溶液各加1-2M Tris-HCl pH 7.0-7.5缓冲液5-10μL和1-2M NaCl溶液50-100μL，轻轻震荡摇匀并置于暗室过夜；

5)向步骤4)得到的两个玻璃管中的溶液各加1-2M Tris-HC pH7.0-7.5缓冲液1-5μL和1-2M NaCl溶液10-50μL，轻轻震荡摇匀并置于暗室过夜；

6)分别取步骤5)得到的两个玻璃管中的溶液各200-1000μL于两个1.5mL离心管中，置于台式离心机中以10000-15000rpm的转速离心10-20分钟，加入200-1000μL含100-200mMNaCl、15-25mM Tris-HCl pH 7.0-7.5的缓冲液使金纳米粒子重新分散；

7)将步骤6)得到的两种溶液混合均匀，加入1-2μL 100-200μΜ的腺苷适配体，使适配体与DNA的比例为0.2-1.0；

8)将步骤7)得到的溶液在50-70℃下反应5-20分钟，缓慢冷却至室温，并在2-7℃下保存。

2.如权利要求1所述的一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中氯金酸溶液的浓度为1mM，柠檬酸钠溶液的浓度为38.8mM，保存温度为4℃。

3.如权利要求1所述的一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中巯基DNA1和巯基DNA2的浓度为100μM、体积为6.6μL，室温放置时间为1小时。

4.如权利要求1所述的一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中金纳米粒子溶液体积为600μL，MUA的浓度为100μM、体积为6.6μL，最终体积为1mL，置于暗室时间为16小时。

5.如权利要求1所述的一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中向两个玻璃管中的溶液各加1M pH 7.5的Tris-HCl缓冲液8.4μL，1M NaCl溶液76μL。

6.如权利要求1所述的一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中向两个玻璃管中的溶液各加1M pH 7.5的Tris-HCl缓冲液4.2μL和1M NaCl溶液42μL。

7.如权利要求1所述的一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤6)分别取两个玻璃管中的溶液各500μL于两个1.5mL离心管中，置于台式离心机中以13000rpm的转速离心15分钟；加入500μL含1500mM NaCl，20mM Tris-HCl pH 7.0的缓冲液使金纳米粒子重新分散。

8.如权利要求1所述的一种可视化金纳米粒子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤7)中腺苷适配体的体积为1.75μL、浓度是100μΜ，适配体与DNA的比例为0.6。