[发明专利]一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法

摘要

本发明涉及一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：A、菌株活化与扩培：无菌条件下，取适量液体培养基配制燕麦镰刀菌菌悬液；B、利用高压微射流均质机反复高压均质5‑10次，得铁皮石斛破壁匀浆；C、发酵培养：在发酵罐中注入适量液体培养基，称取铁皮石斛破壁匀浆、燕麦镰刀菌种子液加入发酵罐中，发酵完成得发酵液；D、多糖纯化：发酵完成后，用脱色活性炭，静置吸附1h，再过滤去渣，得滤液，真空抽滤得沉淀，乙醇洗涤3次，真空干燥得小分子量铁皮石斛多糖。本发明制备的小分子量铁皮石斛多糖平均分子量小于300kDa，可以有效促进皮肤益生菌的增殖，并可提高皮肤表面朗格汉斯细胞密度，提升肌肤免疫力及防御力。

主权项

一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：A、菌株活化与扩培：无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1×105‑1×106 CFU/mL的菌悬液，所述菌种为燕麦镰刀菌，菌种保藏号CICC 14038 ，然后取0.2‑0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，20‑30℃温度下培养24‑48h；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度20‑30℃，摇瓶转速200r/min，供氧培养24‑72h，氧浓度0.010‑0.030mol/L，得燕麦镰刀菌发酵种子液，该发酵种子液中的燕麦镰刀菌浓度达1×104‑1×105 CFU/mL；所述液体培养基为含15.0‑30.0g/L蔗糖、5.0‑10.0g/L酵母粉的MS液体培养基；B、铁皮石斛破壁处理：50‑52℃条件下，按质量比1:20将铁皮石斛粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，以刮边搅拌15rpm的速度，搅拌6‑8h，然后利用高压微射流均质机反复高压均质5‑10次，均质压力设90‑130MPa，均质温度50‑52℃，得铁皮石斛破壁匀浆；C、 发酵培养：在发酵罐中注入适量液体培养基，称取步骤B所得铁皮石斛破壁匀浆投入发酵罐中，量取铁皮石斛破壁匀浆体积5.0‑10.0%的燕麦镰刀菌种子液加入发酵罐中，然后加入KH2PO4和Na2HPO4缓冲溶液调节发酵罐中的料液pH至5.5‑7.0，在25‑35℃温度下供氧发酵3‑5d，氧浓度控制在0.020‑0.040mol/L，发酵完成得发酵液；D、多糖纯化：发酵完成后降至室温，向发酵罐中加入发酵液质量0.5‑1.0%的硅藻土助滤剂及发酵液质量5.0‑8.0%的脱色活性炭，静置吸附1h，再以板框压滤机过滤去渣，得滤液，然后将滤液与Sevage试剂按照体积比4.0‑6.0:1.0进行混合，充分振荡30min，3000r/min转速离心10min，取上清液；再将上清液与质量浓度为95%的乙醇按质量比1.0:1.0‑3.0进行混合，静置12‑36h，真空抽滤得沉淀，用质量浓度为80%的乙醇洗涤3次，60℃下真空干燥24h，得小分子量铁皮石斛多糖。