[发明专利]一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法

说明书

本发明涉及一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：A、菌株活化与扩培：无菌条件下，取适量液体培养基配制燕麦镰刀菌菌悬液；B、利用高压微射流均质机反复高压均质5‑10次，得铁皮石斛破壁匀浆；C、发酵培养：在发酵罐中注入适量液体培养基，称取铁皮石斛破壁匀浆、燕麦镰刀菌种子液加入发酵罐中，发酵完成得发酵液；D、多糖纯化：发酵完成后，用脱色活性炭，静置吸附1h，再过滤去渣，得滤液，真空抽滤得沉淀，乙醇洗涤3次，真空干燥得小分子量铁皮石斛多糖。本发明制备的小分子量铁皮石斛多糖平均分子量小于300kDa，可以有效促进皮肤益生菌的增殖，并可提高皮肤表面朗格汉斯细胞密度，提升肌肤免疫力及防御力。

技术领域

本发明涉及天然产物有效成分提取技术领域，特别涉及一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法。

背景技术

铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall.ex Lindl）为兰科（Orchidaceae）石斛属（Dendrobium）多年生附生型草本植物，富含石斛多糖、石斛碱、氨基酸、菲类化合物及多种微量元素，是我国传统的名贵中药材。铁皮石斛中多用于保健品行业，最主要的活性成分为石斛多糖，口服具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗氧化及延缓衰老等功效。目前化妆品产业也开始应用铁皮石斛多糖作为化妆品原料，但大多是发挥铁皮石斛多糖具备大分子量（1000kDa）的持久保湿功效，而对于小分子量石斛多糖（平均分子量小于300kDa）在增强皮肤免疫力方面的功效研究则基本未见文献报道。

皮肤作为生态系统，是微生物菌群赖以生存的栖身之地，每平方厘米约有十亿细菌在皮肤表面互利共生，形成微生态的防护盾。在人体皮肤的表面，存在着益生菌、有害菌，益生菌主要有双歧杆菌，嗜酸乳杆菌等乳酸菌属，有害菌则包括链球菌和金黄色葡球菌等。在皮肤卫生情况良好、正常菌群平衡，益生菌占种群优势，皮肤上的代谢产物（皮脂、汗液）大多被有益菌群利用，促使pH下降和皮肤屏障形成，能够抑制有害菌，皮肤状态正常；但当皮肤菌群紊乱，有害菌处于优势地位时，皮肤pH上升，皮肤屏障功能消失，会导致有害微生物侵蚀皮肤，发生炎症。

朗格汉斯细胞(Langerhans cell，LC)是免疫反应中重要的抗原呈递细胞和单核吞噬细胞，能捕获和处理侵入皮肤的抗原，形成抗原肽-MHC分子复合物，并传递给T细胞，可使特异性T细胞增殖和激活，引发免疫应答。

因此，只要能证明本发明制备的小分子量石斛多糖能促进皮肤表面益生菌的生长，及提高皮肤中朗格汉斯细胞的密度，就能够表征其在提高皮肤免疫力方面的作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题，是提供一种平均分子量小于300kDa的小分子量铁皮石斛多糖的制备方法，该方法制备的小分子量铁皮石斛多糖可以促进皮肤益生菌增殖，提高皮肤免疫力。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A、菌株活化与扩培：无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1×10⁵-1×10⁶ CFU/mL的菌悬液，所述菌种为燕麦镰刀菌，菌种保藏号CICC 14038 ，然后取0.2-0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，20-30℃温度下培养24-48h；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度20-30℃，摇瓶转速200r/min，供氧培养24-72h，氧浓度0.010-0.030mol/L，得燕麦镰刀菌发酵种子液，该发酵种子液中的燕麦镰刀菌浓度达1×10⁴-1×10⁵ CFU/mL；所述液体培养基为含15.0-30.0g/L蔗糖、5.0-10.0g/L酵母粉的MS液体培养基；