[发明专利]一种蛋白质结构域与线性生物大分子相互作用的测定方法有效
| 申请号： | 201710115976.7 | 申请日： | 2017-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN106896093B | 公开（公告）日： | 2019-12-17 |
| 发明（设计）人： | 何海伦;黄嘉丰;吴日帮;马昌杯;刘丹;张姜;廖斌强 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 410083 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供了一种利用疏水荧光探针ANS检测蛋白质结构域与线性生物大分子相互作用的方法，属于生物技术领域。该方法利用线性生物大分子底物与蛋白质结构域的相互作用，来封闭蛋白质结构域表面的疏水区域，从而阻断疏水荧光探针ANS与蛋白质结构域表面疏水区结合，造成荧光强度降低。该方法可应用于蛋白质结构域与线性生物大分子相互作用的定性定量分析，为研究线性生物大分子与蛋白质结构域相互作用提供新的实验思路及技术手段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白质 结构 线性 生物 大分子 相互作用 测定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种重组蛋白质结构域与线性生物大分子相互作用的测定方法，包括以下步骤：/na.重组蛋白质结构域分离纯化；/nb.制备线性生物大分子底物溶液；/nc.重组蛋白质结构域与线性生物大分子底物混合反应；/nd.荧光探针ANS结合反应；/ne.荧光强度测定；/n具体为：a.重组表达GST-结构域融合蛋白并分离纯化，重组蛋白质结构域溶液最终浓度控制为0.5mg/ml；b.用20mM pH 7.4的PBS缓冲液溶解线性大分子底物，终浓度为1mg/ml；c.取100μl步骤a制备的的0.5mg/ml的重组蛋白质结构域和100μl步骤b制备的1mg/ml的线性大分子底物溶液混合，37℃温浴5min；d和e.加入1μl 8mM荧光探针ANS，扫描加入线性大分子前后重组蛋白质结构域混合溶液的荧光强度，其中激发波长为374nm，检测发射波长为485nm，每个样品设置三个平行，重复检测5次，并根据相互作用前后的相对荧光强度，判断重组蛋白质结构域与线性生物大分子之间疏水作用力的相对强弱；/n其中，步骤a中使用的重组蛋白须具有表面疏水区。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中南大学，未经中南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710115976.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种超平整的表面等离子共振芯片的制作方法
- 下一篇：一种电子鱼漂
