[发明专利]利用等位基因特异性抑制序列变体的核酸扩增

摘要

本发明涉及利用等位基因特异性抑制序列变体的核酸扩增。本发明是选择性扩增目标序列的某些变体的改进方法，其通过等位基因特异性的抑制目标序列的一种或多种其它变体的扩增来得到增强。这种改进通过提供与目标序列的需要变体的杂交亲和力低于与目标序列的不需要变体的杂交亲和力的寡核苷酸，和任选通过提供化学修饰的引物和热启动条件来实现。

主权项

一种选择性扩增目标序列的需要变体的方法，所述目标序列以多种变体形式存在，所述方法包括以下步骤：a)在反应混合物中提供可能包含所述目标序列的至少一种变体的样品；b)提供能与所述目标序列的多种变体杂交的第一寡核苷酸；c)提供能与所述目标序列的多种变体杂交的第二寡核苷酸，其中所述第二寡核苷酸的至少部分在3’末端或其附近的一个或多个核苷酸中包含修饰的碱基，且其中所述修饰的碱基是于环外氨基基团的修饰；d)提供第三寡核苷酸，其与所述目标序列的需要变体杂交的亲和力低于与所述目标序列的不需要变体杂交的亲和力，并设计为与所述第二寡核苷酸杂交相同的链且位于所述第二寡核苷酸下游0‑60个核苷酸之间；e)提供基本上没有5’‑3’核酸酶活性的核酸聚合酶；f)使所述反应混合物进行聚合酶链式反应，其中所述第一和第二寡核苷酸的量是不相等的，从而使得第一寡核苷酸过量存在；并且当所述第三寡核苷酸杂交于所述目标序列的不需要变体时，所述第三寡核苷酸显著抑制所述核酸聚合酶对所述第二寡核苷酸的延伸，但是当所述第三寡核苷酸杂交于所述目标序列的需要变体时，其基本上不抑制所述核酸聚合酶对所述第二寡核苷酸的延伸。