[发明专利]一种骨髓来源的内皮祖细胞培养方法

摘要

本发明公开了一种骨髓来源的内皮祖细胞培养方法，属于细胞培养技术领域。该方法是将已提取的骨髓用红细胞裂解液进行处理后分离获得骨髓单个核细胞，清洗后将所得单个核细胞接种到预包被纤维连接蛋白的培养皿中利用完全培养基进行培养，培养一段时间后，利用胰蛋白酶消化细胞后，接种到培养瓶中进行差速贴壁培养和差速消化培养。所用的完全培养基，是在无血清培养基EGM2中添加胎牛血清、血管内皮生长因子、糖皮质激素、维生素C、上表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、集落刺激因子和血小板源性生长因子制成。该方法操作步骤较简单、花费时间短，一次分离数量多，获得细胞传代代次多等特点。

主权项

1.一种骨髓来源的内皮祖细胞培养方法，其特征在于，将已提取的骨髓用红细胞裂解液进行处理后分离获得骨髓单个核细胞，清洗后将所得的骨髓单个核细胞接种到预包被纤维连接蛋白的培养皿中利用完全培养基进行培养，培养一段时间后，利用胰蛋白酶消化细胞后，接种到培养瓶中进行差速贴壁培养和差速消化培养；所述完全培养基，是在无血清培养基EGM2中添加10％(V/V)胎牛血清FBS，8～12ng/mL血管内皮生长因子VEGF，0.4‰(V/V)糖皮质激素，1‰(V/V)维生素C，1‰(V/V)上表皮生长因子EGF，5ng/mL碱性成纤维细胞成长因子bFGF，2ng/mL集落刺激因子CSF，1‰(V/V)血小板源性生长因子PDGF。