[发明专利]一种芳香烃受体与其介导的抗体的免疫检测方法

摘要

本发明涉及一种芳香烃受体与其介导的抗体的免疫检测方法，本发明从鲤鱼肝脏中分离并纯化的芳香烃受体与PAHs结合制备包被抗原吸附在固相载体上，然后加入待测PAHs样品、AhR和相应抗体，固相上的PAHs‑AhR和待测PAHs‑AhR与抗体进行竞争反应，反应后加入酶标二抗，最后用底物显色加以测定。根据已知PAHs的标准系列和待测样品的OD值计算抑制率，根据抑制率与PAHs浓度之间的对数关系作图即得标准曲线，并推算出待测PAHs的浓度。本发明可以与AhR抗体对水体痕量PAHs进行检测；检测特异性强，操作简便，灵敏度高，样品用量少，可用于现场检测。

主权项

1.一种芳香烃受体与其介导的抗体的免疫检测方法，包括：(1)取喂养于含多环芳烃PAHs水中的鲤鱼的肝脏，清洗后吸干水分，然后加入HEDG缓冲液匀浆，离心取上清，纯化，得到芳烃受体AhR；(2)将AhR溶液中加入PAHs溶液，混匀后静置于4℃条件下放置30min，得到免疫抗原PAHs‑AhR；(3)向96孔酶标板中每孔加入PAHs‑AhR稀释液100μL，4℃包被12h，倒出孔内液体，用洗涤液振荡洗涤，拍干，每孔加封闭液200μL，37℃封闭60min，倒出孔内液体，洗涤，拍干，每孔加入一抗稀释液50μL和不同浓度的PAHs 50μL，同时设置空白对照，于37℃温育60min，重复上述洗涤步骤，拍干待用，每孔加入酶标二抗稀释液100μL于37℃温育60min，重复上述洗涤步骤，拍干待用，每孔加入TMB 100μL底物溶液，室温下显色15min，每孔加入终止液50μL终止反应，采用酶标仪测定OD值；以PAHs浓度的对数为横坐标，抑制率纵坐标，绘制标准曲线；其中一抗为AhR抗体，一抗稀释液：PBS配置的1g·L‑1的AhR溶液稀释一抗，得到一抗稀释液。