[发明专利]生产利妥昔单抗的高表达、高稳定性CHO细胞株及其构建方法在审
| 申请号： | 201710087562.8 | 申请日： | 2017-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN108456660A | 公开（公告）日： | 2018-08-28 |
| 发明（设计）人： | 沈彬彬;王蕙文;吴幼玲 | 申请（专利权）人： | 浙江特瑞思药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/13;C12N15/85;C07K16/28 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 陈详;陆凤 |
| 地址： | 313000 浙江省湖州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种生产利妥昔单抗的高表达、高稳定性CHO细胞株及其构建方法。具体地本发明利用经悬浮驯化的CHO‑K1作为宿主细胞，构建单克隆抗体轻链(Light Chain,LC)pcDNA3‑RX‑Neo和重链(Heavy Chain,HC)pcDNA3‑RX‑GS双表达质粒，稳定转染外源双质粒，经双筛选标记筛选、基因扩增和对基因扩增后细胞系进行筛选，得到了适合无血清悬浮培养的、稳定的、高效表达利妥昔单抗的TRS001细胞株D3G6C11。其产量在1.7‑2.2g/L之间,为大规模产业化制备利妥昔单抗奠定了良好基础。 | ||
| 搜索关键词： | 利妥昔单抗 构建 高稳定性 基因扩增 高表达 筛选 单克隆抗体 双表达质粒 高效表达 筛选标记 宿主细胞 悬浮培养 产业化 双质粒 无血清 细胞株 驯化 轻链 外源 重链 转染 制备 悬浮 生产 | ||
【主权项】：
1.一种构建高产利妥昔单抗的细胞株的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)提供编码利妥昔单抗重链和轻链的核苷酸序列，分别将所述编码利妥昔单抗重链和轻链的核苷酸序列插入到同一pcDNA3.0质粒，从而得到含有编码利妥昔单抗重链和轻链的核苷酸序列的重组质粒pcDNA3‑RX‑Neo；(2)提供人源性GS基因核苷酸序列，将所述人源性GS基因核苷酸序列插入所述重组质粒pcDNA3‑RX‑Neo，从而获得重组质粒pcDNA3‑RX‑GS；(3)将所述重组质粒pcDNA3‑RX‑Neo和所述重组质粒粒pcDNA3‑RX‑GS共转染至CHO‑K1细胞株中，经过筛选从而获得所述高产利妥昔单抗的细胞株。
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