[发明专利]一种乙型肝炎病毒cccDNA的数字微滴PCR检测方法及其试剂盒在审
| 申请号： | 201710080657.7 | 申请日： | 2017-02-15 |
| 公开（公告）号： | CN108441578A | 公开（公告）日： | 2018-08-24 |
| 发明（设计）人： | 张继明;江培学;毛日成 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200031 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属生物技术领域，涉及一种检测乙型肝炎病毒共价闭合环状脱氧核糖核酸的方法以及试剂盒。本发明采用专用组织DNA提取试剂盒提取HBV DNA，并采用选择性荧光定量PCR技术对乙型肝炎病毒cccDNA进行检测，核酸提取后，采用PSAD酶处理，及采用数字微滴PCR方法扩增目的基因并直接定量，提高检测灵敏性和特异性，检测结果表明，能对HBVcccDNA进行准确定量分析，明显优于一般方法，具有特异性好，灵敏度高，定量准确，快速简便，重复性好的特点，本发明的方法及试剂盒可用于HBVcccDNA检测，也可作为临床实验室对HBV感染的辅助诊断方法和临床治疗效果的监测手段。 | ||
| 搜索关键词： | 乙型肝炎病毒 试剂盒 微滴 环状脱氧核糖核酸 临床治疗效果 生物技术领域 荧光定量PCR 定量分析 辅助诊断 共价闭合 核酸提取 监测手段 检测结果 检测灵敏 目的基因 灵敏度 种检测 检测 可用 扩增 | ||
【主权项】：
1.一种乙型肝炎病毒cccDNA的数字微滴PCR 检测方法，其特征在于，其包括：在按下述方法设计的引物和探针存在下，用PSAD 酶预处理乙肝病毒DNA，实现对HBVcccDNA 特异性检测：1) 根据HBV 全序列，在HBV 基因组前C 编码区，设计并合成如下序列的引物和探针：PCR引物F ：5’‑TCCCCGTCTGTGCCTTC‑3’(nt1547‑nt1565)PCR引物R ：5’‑CCCCAAAGCCACCCAA‑3’(nt1902‑nt1887)2) 组成乙型肝炎病毒cccDNA数字微滴PCR 诊断试剂盒；3) 制备反应液；4) PSAD 酶处理HBV DNA；5) 定量检测待测样品中HBVcccDNA 的含量。
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