[发明专利]暗色丝孢霉病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合及试剂盒

摘要

本发明提供一种暗色丝孢霉病病原菌实时荧光定量PCR检测引物和探针组合及试剂盒。所述引物和探针组合的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑12所示。本发明的试剂盒能够快速、特异、灵敏、稳定对暗色丝孢霉病病原菌进行分子诊断。在建立了可靠的暗色丝孢霉病病原菌检测体系的基础上，本发明针对性地设计了竞争性内参，确保阴性结果的真实可信。同时，本发明在DNA提取方案和分子检测方法上均做了一些针对性对性的优化，以确保暗色丝孢霉病中的病原菌准确检出。

主权项

暗色丝孢霉病病原菌RT‑PCR检测引物和探针组合，其特征在于，该组合包括：(I)用于检测暗色真菌的通用引物和探针，所述暗色真菌包括瓶霉属、外瓶霉属、枝孢霉属和着色霉属的暗色真菌Panblack‑F：5′‑CTGATCTGTCCTCCTAATCG‑3′Panblack‑R：5′‑GCCTGCTTTGAACACTCTAAT‑3′Panblack‑P：5′‑FAM‑ATGCCCTTC[A][C][T]GGGTGT‑BHQ1‑3′其中，[A]、[C]、[T]表示锁核酸；(II)用于检测皮炎外瓶霉的特异性引物和探针Eder‑F：5′‑GTGTTGGACGGTCTGGTC‑3′Eder‑R：5′‑ATACGTGCTCAGTGAAGAAG‑3′Eder‑P：5′‑FAM‑AATGACGGCGGCCTGGTTGGAC‑BHQ1‑3′；(III)用于检测甄氏外瓶霉的特异性引物和探针Ejea‑F：5′‑CTTCAAACCGTCCTCTGG‑3′Ejea‑R：5′‑AACAACGGATCTCTTGGTT‑3′Ejea‑P：5′‑FAM‑GCCCGCGCTCGTCGGTGG‑BHQ1‑3′；以及(IV)用于检测疣状瓶霉的特异性引物和探针PV‑F：5′‑CTTGCTGCATGTTGCTTTGGC‑3′PV‑R：5′‑TAGGTTGGCTATCGGCGGAC‑3′PV‑P：5′‑FAM‑GGACCCGTCTCACGACCGCC‑BHQ1‑3′。