[发明专利]骨骼肌组织冰冻切片肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色方法

摘要

本发明提供了骨骼肌组织冰冻切片肌球蛋白三磷酸腺苷酶（ATPase）染色试剂盒，包含了CaCl₂缓冲溶液、醋酸盐缓冲液、底物孵育液、2wt.%氯化钴溶液、1wt.%硫化铵溶液。本发明建立了一套骨骼肌组织冰冻切片肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色试剂盒，这样使用方便，不仅提高了工作效率，缩短了病例的出报告周期，而且也节省了试剂，大幅度降低成本。并获得稳定且满意的结果。

主权项

1.骨骼肌组织冰冻切片肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色试剂盒的染色方法，其特征在于：染色方法，包括如下：（1）骨骼肌活检组织，OCT包埋，经液氮预冷的异戊烷速冻，用恒冷切片机在‑22℃下切片，厚度为6µm，保存于‑20℃或‑35℃冰箱；（2）取每例冰冻切片两片分为A、B两组，用电吹风吹干水蒸汽；（3）碱性前孵育：将A组切片滴加CaCl2 缓冲溶液100μL，室温10 min；（4）酸性前孵育：将B组切片滴加醋酸盐缓冲液100μL，室温10 min，用滤纸将B组切片组织周围的醋酸盐缓冲液吸掉，滴加CaCl2 缓冲溶液100μL，室温30sec；（5）底物孵育：用滤纸将A、B两组切片组织周围的CaCl2 缓冲溶液吸掉，滴加入底物孵育液100ul，37℃，孵育60 min；（6）用滤纸将切片组织周围的底物孵育液吸掉；（7）滴加2wt.%氯化钴溶液0.5mL，室温下放置5 min；（8）自来水冲洗3 min，双蒸水浸洗2 min；（9）将切片插入1wt.%硫化铵溶液中，室温下浸泡1 min；（10）流水冲洗5min；（11）将切片经过95%乙醇、100%乙醇脱水、二甲苯透明、加拿大树胶封固后，染色完成；所述试剂盒包含以下成分：（1）1号液，CaCl2 缓冲溶液： 0.1 mol/L甘氨酸溶液，0.1 mol/LNaCl溶液，1 mol/L CaCl2，0.1 mol/L NaOH ，用0.1mol/L NaOH 调节pH值至9.5±0.01； (2) 2号液，醋酸盐缓冲液：0.2 mol/L 醋酸钠，0.2 mol/L 醋酸 ，用0.1mol/L HCl调pH值至4.6±0.01；(3) 3号液，底物孵育液：取1号液中的CaCl2缓冲溶液10ml，ATP‑二钠盐25mg，用0.1mol/L NaOH调pH至9.4±0.01；（4）4号液，2wt.%氯化钴溶液；（5）5号液，硫化铵溶液： 1wt%硫化铵溶液，在使用前的新鲜配制。